小鼠Th2型T淋巴细胞的培养方法与注意事项！

一、细胞简介

平台编号：Bio-68137

细胞规格：1×10Cells/T25培养瓶

细胞信息：D10.G4.1

细胞名称：小鼠Th2型T淋巴细胞

用途：研究

注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准）

二、详细信息

产品名称：D10.G4.1细胞；小鼠Th2型T淋巴细胞

细胞数量：1*10^6

组织来源：淋巴结

细胞种属：小鼠源

生长特性：悬浮

培养基：RPMI-1640

形态特征：淋巴母细胞

传代方法：每周两次更换新鲜培养基，2×10^5cells/ml种下，细胞密度达到1×10^6cells/ml时或者IL-2和IL-1将耗尽时传代。

培养条件：胎牛血清至最终浓度为10％。环境：空气，95％;二氧化碳（CO2），5％；温度，37

细胞描述：细胞对蛋清白蛋白特异，Con A刺激的培养基使D10.G4.1细胞含有IL-4和IL-5。

细胞冻存：液氮冻存（冻存液基础培养基+20S+10%DMSO）

细胞运输：干冰运输或活细胞运输

三、细胞的培养方法

1、细胞传代：细胞密度达到80-90%时即可传代

弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次；

加入2ml0.25%胰酶（T25瓶），使胰酶覆盖整个瓶或皿，盖好放入培养箱消化；

1-2min后，显微镜下观察细胞，若大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入完全培养基终止消化；若细胞还是贴壁，放回培养箱继续消化至可以轻轻吹打下为止；

将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清；

用新鲜培养基重悬后加入培养瓶或皿中，T25培养瓶加6-8ml培养基；

悬浮细胞直接离心收集，细胞沉淀重悬后分到新培养瓶中。

2、细胞复苏：

将冻存管在37温水中快速摇晃融化，时间1min左右，加入4-5ml培养基混匀。

在1000RPM左右条件下离心4min，弃上清,加1-2ml培养基吹匀，将细胞悬液加入培养瓶中，补加适量培养基。

3、细胞冻存：待细胞生长状态良好时进行细胞冻存保种

弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次，加入1mL 0.25%胰蛋白酶（T25瓶）

1-2min后，显微镜下观察细胞，大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入完全培养基终止消化；

将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清，加1ml冻存液重悬细胞；

将冻存管放入程序降温盒，放入-80冰箱，4小时后将冻存管转入液氮罐储存。

四、注意事项

（一）冻存细胞接收后的处理：

1、干冰运输，收到细胞后立即转入-80冰箱短暂中转或直接复苏；

2、收到细胞后，若发现干冰已经完全挥发、冻存管瓶盖破裂脱落,请立即拍照后与我们联系。

（二）复苏细胞接收后的处理：

1、收到细胞后，请首先检查培养瓶是否破损或漏液，培养液是否混浊，如有漏液及培养液混浊情况请立即拍照把图片发给我们。

2、75%酒精消毒瓶身后放培养箱中静置4-6h后，在显微镜下确认细胞状态并拍照100倍和200倍的照片，若有贴壁细胞脱落，可收集上清离心，将沉淀用新的培养基接种至新的培养瓶或培养皿中。

3、建议收到当天不要消化处理，如果细胞长满90%，可选择传代处理。

4、如您收到细胞3天内没有反馈相关问题，出现的细胞问题将不提供免费重发服务。