淡色生赤壳菌的培养方法与实验内容！

淡色生赤壳菌是Bionectria属的微生物，原产地为中国。该菌分离自四川雅安，为梨果贮藏期病害病原菌。菌丝生长极其缓慢；平板背面产生黄色色素，菌落边缘呈轮纹状向外扩散，正面呈橙红色，有白色沙绒状；显微条件下菌丝无色；在NCBI上通过基因对比以及构建发育树判断其为淡色生赤壳菌；分类地位：子囊菌亚门（Ascomycotina)生赤壳属（Bionectria）淡色生赤壳（Bionectria ochroleuca）。主要用途为分类。

一、菌种简介

平台编号：Bio-19446

规格：培养物

拉丁属名：Bionectria Ochroleuca

中文名称 ：淡色生赤壳菌

拉丁属名 ：Bionectria

种名加词 ：ochroleuca (Schwein.) Schroers & Samuels

收藏时间* ：2008-9-23

来源历史 ：四川农业大学

原产国 ：中国

资源归类编码 ：15151500000

模式菌株 ：非模式菌株

主要用途 ：分类

特征特性 ：该菌分离自四川雅安，为梨果贮藏期病害病原菌。菌丝生长极其缓慢；平板背面产生黄色色素，菌落边缘呈轮纹状向外扩散，正面呈橙红色，有白色沙绒状；显微条件下菌丝无色；在NCBI上通过基因对比以及构建发育树判断其为淡色生赤壳菌；分类地位：子囊菌亚门（Ascomycotina)生赤壳属（Bionectria）淡色生赤壳（Bionectria ochroleuca）

生物危害程度 ：四类

致病对象 ：无

分离基物 ：梨果

采集地区 ：四川雅安

采集具体地点 ：桃园

培养基信息 ：培养基编号: 14 培养基名称: PDA

培养温度 ：28

资源保护类型 ：培养物

保藏方法 ：定期移植法

共享方式 ：公益性共享

提供形式 ：斜面培养物

实物状态 ：有实物

用途：研究

注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准）

二、菌种特性

淡色生赤壳菌，细胞圆球状,在直角两个平面交替分裂形成四联状,一般细胞成对生,单生者罕见,不成链状排列。革兰氏阳性,不运动,兼性厌氧。在MRS培养基上菌落小,呈白色。沿洋菜穿刺线的生长物呈丝状。接触酶阴性,不产细胞色素。功用产酸,菌群,维持肠道微生态平衡。在动物体内对病原微生物有颉颃作用,可竞争性地抑制病原微生物,,产生有益的代谢产物,激活酸性蛋白酶的活性,参与机体的,防止有害物质产生。

三、培养方法

1、菌种是指食用菌菌丝体及其生长基质组成的繁殖材料。菌种分为母种（一级种）、原种（二级种）和栽培种（三级种）三级。工业发酵的有用菌种，其筛选步骤包括菌种分离、初筛和复筛。

2、挑选具有某种能力的有用菌种，也称种子制备，是指菌种在一定条件下，经过扩大培养成为具有一定数量和质量的纯生产菌种的制备过程。以作接入发酵罐中进一步扩大菌体量及合成产物之用。

3、种子制备包括孢子制备和菌丝体制备 菌种制备。

4、保存在沙土管或冷冻管中的生产菌种，用无菌手续挑取少许，接入琼脂斜面培养基上，在25（或较高温度）下培养5～7天（或较长时间。所得孢子还需进一步用较大表面积的固体培养基以获得更多孢子（对于霉菌类孢子制备，多数采用大米、小米之类的天然培养基）。

5、将培养成熟的斜面孢子制成悬浮液，接种到扁瓶固体培养基上，于25～28培养14天。将成熟的扁瓶孢子于真空中抽干，使水分降至10%以下，并放入 4冰箱中备用。一次制得的孢子瓶可在生产上延续使用半年左右。

6、如果有些生产菌种不产孢子，如赤霉素产生菌或产孢子不多的，则可采用摇瓶液体培养制得菌丝体，作种子罐的种子。种子罐的目的是使接入有限的孢子或菌丝体迅速发芽、生长、繁殖成大量菌体。其中的培养基组分应是易于被菌体利用的碳源（如葡萄糖）和氮源（如玉米浆），及无机盐(如磷酸盐)等。作为发酵罐的种子应生命力旺盛、染色深、菌丝粗壮，无杂菌及异常菌体。接种量一般在10%～20%。

四、实验内容

产品仅用于科研实验

1、称量→溶化→调pH→过滤→分装→加塞→包扎→灭菌→无菌检查

2、干热灭菌:装入待灭菌物品→升温→恒温→降温→开箱取物

3、高压蒸汽灭菌:加水→装物品→加盖→加热→排冷空气→加压→恒压→降压回零→排汽→取物→无菌检查

4、过滤除菌:组装灭菌→连接→压滤→无菌检查→清洗灭菌

五、培养及打管说明

1、安瓿瓶开封：用浸过75％酒精的脱脂棉擦净安瓿管，用火焰加热其顶端，滴少量无菌水至加热顶端使之破裂，用锉刀或者镊子敲下已破裂的安瓿管顶端。

2、菌株恢复培养：用无菌吸管吸取0.3--0.5ml适宜的液体培养基，滴入安瓿管内，轻轻振荡，使冻干菌体溶解呈悬浮状。吸取全部菌体悬浮液，移植于1-2支建议的培养基试管中，并在建议的条件下培养。

3、产品仅用于科研注意事项：菌种活化前，请将安瓿管保存在6-10的环境下，某些菌种经过冷冻干燥保存后，延迟期较长，需要连续两次继代培养才能正常生长。

4、复苏后的菌种在传1-2代后使用。

5、暂不启开的安瓿及复苏后需保藏的斜面应于4中保藏。