A-431（人表皮癌细胞）传代培养操作步骤及注意事项！

细胞简介

平台编号：Bio-72957

规格：1×10Cells/T25培养瓶

细胞信息：A-431

细胞名称：A-431（人表皮癌细胞）

种属：人

年龄（性别）：女；85岁

组织来源：皮肤；上皮；皮肤癌

生长特性：贴壁

细胞形态：上皮细胞样

背景描述：皮肤癌细胞株A-431源自一位85岁女性，是由D·J·Giard等人建立的一系列细胞株中的一株。A-431细胞在抗胸腺细胞球蛋白、血清处理的NIH瑞士小鼠中形成类似于恶性黑素瘤快速增长的皮下肿瘤，在普通成纤维细胞和琼脂上形成克隆。A-431细胞是一个超三倍体人细胞株。

生长培养基：DMEM高糖＋10% FBS＋1% P/S

培养条件：气相：空气，95%；CO2，5% 温度：37

用途：(STR鉴定正确)

注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准）

安全性：所有肿瘤和病毒转染的细胞均视为有潜在的生物危害性，必须在二级生物安全台内操作，并请注意防护，所有废液及接触过此细胞的器皿需高压灭菌后方能丢弃。收到细胞后，在倒置镜下(是在4X物镜)观察整个细胞生长情况。

（一）如果细胞未长满，用75%酒精喷洒整个瓶消毒后放到超菌台内，严格无菌操作，打开细胞培养瓶，吸出培养液，换 10ml新鲜培养液后继续培养。

（二）如果细胞已长满，即可进行传代培养。具体步骤如下：

1、弃去培养液，用PBS（不含钙,镁离子）洗1-2次。

2、加1ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，倒放于37培养箱1-3分钟预热，之后翻转培养瓶10-30秒后，在倒置显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量完全培养基终止消化。

3、按6-8ml/瓶补加完全培养基，轻轻打匀后吸出一半，分到新的培养瓶中。如果没有特别说明，收到细胞后的*次传代一般是一传二。

注意事项：

1、观察细胞在低倍镜（4或5X物镜)下进行，否则不能准确判断细胞的传代密度。看细胞的形态请在10X或20X物镜下。

2、瓶中运输培养基不能重复再用,请换用加双抗的新培养基，细胞冻存后,培养基中可不加任何抗生素。

3、有些细胞贴壁不牢，如发现贴壁细胞有脱落，可离心吹打后接种到新瓶内。

4、收到细胞后，若发现培养瓶破损、有液溢出及细胞有污染，请及时与我们。