李氏放线杆菌的培养说明及操作步骤与保藏方法！

一、菌种简介

平台编号：Bio-67873

规格：冻干物

拉丁属名：Actinobacillus Lignieresii

菌株名称：李氏放线杆菌

其他编号：ATCC 19393=NCTC 4976

培养基编号：35

培养温度：37

分离源：典型的牛病变

培养基信息

培养基编号：35

名称：Blond Agar (血琼脂培养基)

备注：Peptone (蛋白胨) 10g Glucose (葡萄糖) 2g NaCl 5g NaH2PO4 2.5gSodium citrate (柠檬酸钠) 5g Brain infusion (脑浸汁) 800mlPig heart infusion (猪心浸) 200ml Sleep Blood (羊血) 10%pH 7.2 [Note]：Preparation of pig brain and pig heart infusion：（1） Smash up 100g fresh pig heart （without fat and blood vessel）.Add distilled water up to 1000ml;（2） Cut 200g fresh pig brain (without blood vessel). Add distilled water up to 1000ml;（3） Keep the two infusions at 50 for 1 hr , then boil for 15 minutes;（4） Cool and filtrate through gauze . [注]猪心和猪脑浸汁法：（1）新鲜猪心除去心头和脂肪，搅碎100克加蒸馏水至1000毫升；（2）新鲜猪脑除去血管，取200克加蒸馏水至1000毫升；（3）50保温1小时，然后煮开15分钟；（4）冷却后用纱布过滤备用。

用途：标准菌种、标准菌株、质控菌种、质控菌株，用于实验室质控、检测

贮藏条件：-20避光储存，使用后放入冰箱内。

保质期：5-20年，应根据菌种状况及时转接。

注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用产品信息以出库为准

二、产品优势

1、产品质量稳定，是为科研和生产提供微生物菌种资源共享服务的专业平台。

2、国内首创封闭管包装，冻干后的菌株使用时添加配套的复苏培养基后迅速而完全溶解。针对不同的菌株提供八种不同的培养方法，保证菌种的复苏质量。

3、严格的质检程序，确保产品质量的稳定性。

4、该类产品广泛使用到食品、药品、化妆品、水产品、化工等行业，疾控中心、质检局、出入境、药检局等等，得到广泛好评。

三、培养说明

培养基名称：营养琼脂（NA）

用途：用于一般细菌培养、转种、复壮和增菌等

成分(g/L)

蛋白胨               10.0

牛肉粉                3.0

氯化钠                5.0

琼脂                 15.0

pH值7.3 ± 0.1      25

用法：称取本品 33.0g ,加热溶解于 1000ml 蒸馏水中,分装三角瓶 ,121高压灭菌 15分钟,备用。

培养基名称：营养肉汤（NB）

四、操作方法

1、安瓿瓶开封：用浸过75％酒精的脱脂棉擦净安瓿管，用火焰加热其顶端，滴少量无菌水至加热顶端使之破裂，用锉刀或者镊子敲下已破裂的安瓿管顶端。

2、菌株恢复培养：用无菌吸管吸取0.3--0.5ml适宜的液体培养基，滴入安瓿管内，轻轻振荡，使冻干菌体溶解呈悬浮状。吸取全部菌体悬浮液，移植于1-2支建议的培养基试管中，并在建议的条件下培养。

3、注意事项：菌种活化前，请将安瓿管保存在6-10的环境下，某些菌种经过冷冻干燥保存后，延迟期较长，需要连续两次继代培养才能正常生长。

4、复苏后的菌种在传1-2代后使用。

5、暂不启开的安瓿及复苏后需保藏的斜面应于4中保藏。

五、保藏方法

1、传代培养保藏法

又有斜面培养、穿刺培养、疱肉培养基培养等(后者作保藏厌氧细菌用),培养后于4-6冰箱内保存。

2、液体石蜡覆盖保藏法

是传代培养的变相方法,能够适当延长保藏时间,它是在斜面培养物和穿刺培养物上面覆盖灭菌的液体石蜡,一方面可防止因培养基水分蒸发而引起菌种死亡,另一方面可阻止氧气进入,以减弱代谢作用。

3、载体保藏法

是将微生物吸附在适当的载体,如土壤、沙子、硅胶、滤纸上,而后进行干燥的保藏法,例如沙土保藏法和滤纸保藏法应用相当广泛。

4、寄主保藏法

用于目前尚不能在人工培养基上生长的微生物,如病毒、立克次氏体、螺旋体等,它们必须在生活的动物、昆虫、鸡胚内感染并传代,此法相当于一般微生物的传代培养保藏法。病毒等微生物亦可用其他方法如液氮保藏法与冷冻干燥保藏法进行保藏。

5、冷冻保藏法

可分低温冰箱(-20-30,-50-80)、干冰酒精快速冻结(约-70)和液氮(-196)等保藏法。

6、冷冻干燥保藏法

先使微生物在极低温度(-70左右)下快速冷冻,然后在减压下利用升华现象除去水分(真空干燥)。有些方法如滤纸保藏法、液氮保藏法和冷冻干燥保藏法等均需使用保护剂来制备细胞悬液,以防止因冷冻或水分不断升华对细胞的损害。