人骨骼肌细胞的运输和保存及使用方法！

一、细胞详述

骨骼肌卫星细胞是位于基膜与肌膜之间未分化的细胞，一般情况下处于静止状态，当肌细胞受到损伤刺激时，卫星细胞被激活，更新，增殖，分化并与原有的骨骼肌细胞相互融合，形成新的肌纤维细胞。

肌组织作为人体的最大组织，同其它组织相比来源更丰富。大量研究证实卫星细胞对骨骼肌受创伤后肌纤维的再生和修复起着重要作用。

二、细胞简介

平台编号：Bio-089926

规格：1×10Cells/T25培养瓶

细胞信息：HSKMC

细胞名称：人骨骼肌细胞

规格：T25 瓶或者 2ml 冻存管

生长特性：贴壁生长

传代比例：细胞 80-90%汇合时 1:2~1:4 传代（建议）

培养条件：90% MEM，10%胎牛血清 ，100U/ml 双抗，37、5% CO2

冻存条件：70%基础培养基+20S+10%DMSO

细胞用途：仅供科研使用，不可用于临床诊断和治疗

三、细胞特性

1）细胞来源于实验动物正常肌肉组织。

2）细胞鉴定：肌动蛋白（α-actin）免疫荧光染色为阳性。

3）经鉴定细胞纯度高于90%。

4）不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌。

5）细胞生长方式：长梭状细胞，贴壁培养。

四、产品的运输和保存

视天气状况和运输距离远近，公司与客户协商后选择下述方式中的一种进行。

1) 1mL冻存细胞悬液装于1.8ml的冻存管中，置于装满干冰的泡沫保温盒中进行运输；收到细胞后请尽快解冻复苏细胞进行培养，如无法立刻进行复苏操作，冻存细胞可在-80的条件下保存1个月。

2) T-25培养瓶充满完全培养基后进行常温运输；收到细胞后请镜下观察细胞生长状态，如铺瓶率超过85%请立即进行传代操作，如悬浮的细胞较多，请将培养瓶至于培养箱中静置过夜以帮助未死亡的悬浮细胞能够再次贴壁。

五、产品使用

1) 本产品仅能用于科研

2) 本产品未通过直接用于活体动物和人的审核

3) 本产品未通过用于活体诊断的审核

六、细胞收到后的处理方法

1、冻存细胞接收后的处理：

1）干冰运输，收到细胞后立即转入液氮或直接复苏；

2）收到细胞后，若发现干冰已经完全挥发、冻存管瓶盖破裂脱落,请立即拍照后与我们联系。

2、复苏细胞接收后的处理：

1）收到细胞后，请首先检查培养瓶是否破损或漏液，培养液是否混浊，如有漏液及培养液混浊情况请立即拍照把图片发给我们。

2）75%酒精消毒瓶身后放培养箱中静置 4-6h 后，在显微镜下确认细胞状态并拍照 100 倍和200 倍的照片，若有贴壁细胞脱落，可收集上清离心，将沉淀用新的培养基接种至新的培养瓶或培养皿中。

3）建议收到当天不要消化处理，如果细胞长满 90%，可选择传代处理。

4）如您收到细胞 3 天内没有反馈相关问题，出现的细胞问题将不提供免费重发服务。

七、细胞培养方法

1、细胞传代：细胞密度达到 80-90%时即可传代

弃去培养上清，用 PBS 或生理盐水清洗 1-2 次；

加入 2ml0.25%胰酶（T25 瓶），使胰酶覆盖整个瓶或皿，盖好放入培养箱消化；

1-2min 后，显微镜下观察细胞，若大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入完全培养基终止消化；若细胞还是贴壁，放回培养箱继续消化至可以轻轻吹打下为止；

将细胞悬液 1000RPM 左右条件下离心 4min，弃上清；

用新鲜培养基重悬后加入培养瓶或皿中，T25 培养瓶加 6-8ml 培养基；

悬浮细胞直接离心收集，细胞沉淀重悬后分到新培养瓶中。

2、细胞复苏：

将冻存管在 37温水中快速摇晃融化，时间 1min 左右，加入 4-5ml 培养基混匀。

在 1000RPM 左右条件下离心 4min，弃上清,加 1-2ml 培养基吹匀，将细胞悬液加入培养瓶中，补加适量培养基。

3、细胞冻存：待细胞生长状态良好是进行细胞冻存

弃去培养上清，用 PBS 或生理盐水清洗 1-2 次，加入 2ml0.25%胰酶（T25 瓶）

1-2min 后，显微镜下观察细胞，大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入完全培养基终止消化；

将细胞悬液 1000RPM 左右条件下离心 4min，弃上清，加 1ml 冻存液重悬细胞；

将冻存管放入程序降温盒，放入-80冰箱，4 小时后将冻存管转入液氮罐储存。