人成骨肉瘤细胞的复苏与传代及冻存操作步骤！

人成骨肉瘤细胞；Saos-2是Fogh J和Trempe G分离和鉴定的众多人类肿瘤细胞系中的一种；该细胞来自一位11岁的白人女性的骨肉瘤组织。患者经过放疗以及氨甲喋呤、阿霉素、长春新碱、环磷酰胺和 aramycin-C等多种药物治疗。该细胞在免疫抑制小鼠中不致瘤，细胞表达表皮生长因子EGF受体、转化生长因子β（1型和2型）受体。

一、细胞简介

平台编号：Bio-73143

规格：1×10Cells/T25培养瓶

拉丁属名：Saos-2

细胞名称：人成骨肉瘤细胞

种属：人

年龄（性别）：女；11岁

组织来源：骨；骨肉瘤

生长特性：贴壁

细胞形态：上皮细胞样

背景描述：Saos-2细胞是由J·Fogh和G·Trempe分离和鉴定的众多人肿瘤细胞系中的一种。该病人曾经多种药物治疗，包括RTG、methotrexate、adriamycin vincristine、cytoxan和aramycin-C。Saos-2细胞在免疫抑制小鼠中不致瘤，但在半固体培养基中形成集落。

生长培养基：McCoy's 5A＋15% FBS＋1% P/S

培养条件：气相：空气，95%；CO2，5% 温度：37

用途：(STR鉴定正确)

注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用产品信息以出库为准

二、人成骨肉瘤细胞常规说明

冻存液成分：10%DMSO+40S+50%基础培养液

细胞质检情况：不含细菌、真菌、支原体等微生物污染

传代建议：1:2~1:3传代，2~3天换液1次

特别提醒：签收细胞后，如细胞状态不佳，或培养中遇到问题，烦请当天尽快联系，以便处理。当天及时反馈细胞情况和细胞照片是售后跟踪处理重要的参考依据，请务必重视。

三、人成骨肉瘤细胞的复苏

1、把冻存管从液氮中取出来，立即投入37水浴锅中，轻微摇动。液体都融化后（大概1-1.5分钟），拿出来喷点酒精放到超净工作台里。

2、把上述细胞悬液吸到装10ml培养基的15ml的离心管中（用培养基把冻存管洗一遍，把粘在壁上的细胞都洗下来），1000转离心5分钟。

3、把上清液倒掉，加1ml培养基把细胞悬浮起来。吸到装有10ml培养基的10cm培养皿中前后左右轻轻摇动，使培养皿中的细胞均匀分布。

4、标好细胞种类和日期、培养人名字等，放到CO2培养箱中培养，细胞贴壁后换培养基。

5、3天换一次培养基。

四、人成骨肉瘤细胞的传代

1、培养皿中的细胞覆盖率达到80%-90%时要传代。

2、把原有培养基吸掉。

3、加适当的胰蛋白酶（能覆盖细胞就行），消化1-2分钟。

4、细胞都变圆后加如入等体积的含血清的培养基终止消化。

5、用移液枪吹打细胞，把细胞都悬浮起来。

6、把细胞吸到15ml的离心管中，1000转离心5分钟。

7、倒掉上清液，加1-2ml培养基，把细胞都吹起来。

8、根据细胞种类把细胞传到几个培养皿中。一般，癌细胞分5个，正常细胞传3个。继续培养。

五、人成骨肉瘤细胞的冻存

把细胞消化下来并离心（同上）。用配好的冻存液把细胞悬浮起来，分装到灭菌的冻存管中，静止几分钟，写明细胞种类，冻存日期。4 30min，-20 30min，-80过夜，然后放到液氮灌中保存。

冻存液的配制：70%的完全培养基+20S+10%DMSO. DMSO要慢慢滴加，边滴边摇。

要注意的就是无菌操作！