酸性磷酸酶检测试剂盒的检测原理与注意事项！

一、背景

酸性磷酸酶检测试剂盒是一种用于快速、便捷地检测细胞或组织样品的裂解或匀浆产物的上清液、血浆、血清、尿液等样品中内源性的酸性磷酸酯酶活性的试剂盒。酸性磷酸酶(Acid Phosphatase)，也称酸性磷酸酯酶，是一种在溶酶体中含量较高的酸性水解酶，被认为是鉴定溶酶体亚细胞组分的标志物。酸性磷酸酶是一个蛋白家族，哺乳动物中其分子量从18kD到100kD不等。酸性磷酸酶分为两类，一类为酒石酸盐敏感型，一类为氟离子敏感型。溶酶体中的酸性磷酸酶为酒石酸盐敏感型，而红细胞和巨噬细胞中的酸性磷酸酶为氟离子敏感型。

血浆中的酸性磷酸酶活性范围在2-7.9U/L，血清中酸性磷酸酶的活性范围在2.5-11.7U/L。精液(semen)中含有高浓度的酸性磷酸酯酶，活力可以达到87-436KU/L。酸性磷酸酶能在酸性条件下脱去磷酸酯的磷酸基团.人体内存在多种酸性磷酸酶同工酶，它们在血清中的浓度可以用来作为诊断相应器官的疾病重要参数.前列腺酸性磷酸酶过高可能暗示前列腺处有肿瘤，而高水平的抗酒石酸酸性磷酸酶则有可能意味着骨癌的风险.因此检测相应组织细胞中酸性磷酸酶的活性具有重要的意义。

二、检测原理

Para-nitrophenyl phosphate(pNPP)是一种常用的磷酸酶显色底物，在酸性条件下，可在酸性磷酸酶作用下生成para-nitrophenol。para-nitrophenol(p-nitrophenol)在碱性条件下，呈黄色产物，可以在400-415nm检测吸光度。产物黄色越深，说明酸性磷酸酶检活性越高，反之则酶活性越低。据此通过比色分析就可以计算出酸性磷酸酶活性水平。

三、注意事项

1、如果希望进行酶活性的绝对定量，进行酶反应时必须注意精确计时。此时推荐采用孵育30分钟等较长的时间，以减小操作过程中的时间误差。同时如果样品中酶活性较高，则可以预先适当稀释样品。

2、样品溶液中须避免出现各种酸性磷酸酶抑制剂。

3、一管显色底物配制后需当日使用完毕，因此请注意适当多准备一些样品一起检测，以避免试剂盒浪费。

4、p-nitrophenol溶液对人体有害，操作时请小心，并注意有效防护以避免直接接触人体或吸入体内。反应终止液有腐蚀性，操作时请小心，并注意有效防护以避免直接接触人体或腐蚀其他物品。

四、应用

酸性磷酸酶检测试剂盒可用于酸性磷酸酶法检测肿瘤细胞的增殖状态：

以细胞浆中酸性磷酸酶活力和细胞增殖之间具有紧密关系为依据,确定细胞数目与酸性磷酸酶活力之间的相关性,建立96孔板微量测定方法,同时运用流式细胞仪检测细胞周期和凋亡,确定凋亡细胞与酸性磷酸酶的关系,并与噻唑兰(MTT)方法进行灵敏度的比较。结果在2种肝癌细胞株(HepG2细胞和CBRH 7919细胞)中,酸性磷酸酶的活力与细胞数目呈正比关系,在(0.5～7)×10 3细胞数范围内呈直线关系,二者相关系数(CV)达0.994;在佛波酯(TPA)刺激肝癌细胞1h后,酸性磷酸酶的活力即显著上升。

相反在三氧化二砷作用后,酸性磷酸酶的活力即显著下降,浓度越高,下降越显著。三氧化二砷作用HepG2细胞2 4h,凋亡细胞仅占3.98%,作用CBRH 7919细胞,在还没有出现凋亡时,酸性磷酸酶的活力即已显著下降。结论检测细胞的酸性磷酸酶活力可作为细胞增殖和凋亡的指标,此方法简便、快速,可用于大批量抗肿瘤药物的筛选。