SW620细胞的培养步骤与传代方法及应用！

一、背景

SW620细胞是从一个51岁男性白人组织中分离得到。由A.Leibovitz等从一个淋巴结建株。细胞系主要由无绒毛的小园球细胞和双极细胞组成。它仅合成少量癌胚抗原（CEA）且在裸鼠中有高度的致瘤性。

二、细胞培养步骤

培养基及培养冻存条件准备：

1）准备L15培养基；优质胎牛血清，10%；双抗，1%。

2）培养条件：气相：空气，95%；二氧化碳，5%。温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。

3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。

三、细胞处理

1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入250px皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。

2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

四、传代方法

1、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

2、加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。

3、按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。

4、将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。

五、应用

用于小白菊内酯及顺铂对人结肠癌SW620细胞增殖、凋亡影响的研究：

肠癌细胞SW620经过小白菊内酯及顺铂作用后,通过MTS法及流式细胞仪检测,观察小白菊内酯及顺铂对人结肠癌细胞SW620细胞增殖及凋亡方面的影响。

1、细胞培养及药物处理SW620细胞接种于含10%胎牛血清的RPMI-1640培养基中,置375%CO2培养箱中培养,常规胰酶消化传代。

2、MTS法检测细胞增殖将对数期生长的SW620细胞消化后,计数,调整细胞浓度为1×105个/ml,分到96孔板,每孔100ul,即每孔细胞为1×104个,常规培养,待细胞贴壁后,进行药物处理。药物作用时间是24h、48h、72h。收集各个时间点的细胞（0h,24h,48h,72h）加入MTS,比例为1/10。即100ul培养液加入10ul检测液。孵育4小时后,酶标仪读板,MTS检测读取OD490数据。采用金正均法判定两药物是否具有协同作用。也称概率相加法,具体的公式：q=EAB/（EA+EB-EA×EB）,公式中EAB为联合处理组的抑制率EA、EB分别为A药和B药单独处理的抑制率,若q值在0.85-1.15间为两药合用单纯相加,若q>1.15为有协同作用,若q<0.85表示两药合用有拮抗作用。

3、流式细胞仪检测细胞的凋亡将SW620细胞接种于6孔板,药物处理48h后收样进行流式细胞凋亡检测。胰酶消化细胞后,用预冷的PBS清洗细胞,将细胞轻轻重悬于预冷的1×结合缓冲液中使得其密度大约为1×108细胞/ml。加入1.25μl Annexin V-FITC。室温（18-24）避光反应15分钟。室温800r/min离心5分钟,去除上清。将细胞用0.5ml预冷的l×结合缓冲液轻轻重悬。加入10μl Propidium Iodide。将样本放置在冰上避光保存。用流式细胞仪检测分析。

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