微量丙二醛(MDA)测定试剂盒(TBA法)的应用！

一、背景

微量丙二醛(MDA)测定试剂盒(TBA法)通过酶系统与非酶系统产生氧自由基，后者能攻击生物膜中的多不饱和脂肪酸，引发脂质过氧化作用，并因此形成脂质过氧化物。如：醛基（丙二醛MDA）、酮基、羟基、羰基、氢过氧基或内过氧基，以及新的氧自由基等。脂质过氧化作用不仅把活性氧转化成活性化学剂，即非自由基性的脂类分解产物，而且通过链式或链式支链反应，放大活性氧的作用。因此，初始的一个活性氧能导致很多脂类分解产物的形成，这些分解产物中，一些是无害的，另一些则能引起细胞代谢及功能障碍，甚至死亡。

氧自由基不但通过生物膜中多不饱和脂肪酸的过氧化引起细胞损伤，而且还能通过脂氢过氧化物的分解产物引起细胞损伤。因而测试MDA的量常常可反映机体内脂质过氧化的程度，间接地反映出细胞损伤的程度。MDA的测定常常与SOD的测定相互配合，SOD活力的高低间接反应了机体清除氧自由基的能力，而MDA的高低又间接反应了机体细胞受自由基攻击的严重程度，通过SOD与MDA的结果分析有助于医学、生物学、药理及工农业生产的发展。

二、产品优点

1、操作简便：可将试剂混合成单试剂操作，全程约50分钟，可测100例左右样本；

2、稳定性好：试剂盒2～8存放12个月有效,试剂配制后至少能存放6个月；呈色稳定，显色后24小时吸光度不变。

3、再现性好：批内CV=2.3%，批间CV=5.34%。

4、回收试验：X=101.8%。

5、受外界影响因素小：干扰因素少，重复性强。

6、测试面广：可测动物血液、组织、各种体液、灌流液等、各种培养细胞、细菌、植物组织、各种水产等，效果均佳。

三、所需仪器及自备试剂

1、分光光度计/酶标仪/半自动生化分析仪（比色测定波长为532nm）

2、恒温水浴箱（孵育温度为95以上）

3、台式离心机

4、漩涡混匀器

5、微量移液器

四、样本收集与前处理

红细胞：需用蒸馏水将红细胞制备成溶血液（100倍溶血液）后测定。

动物组织样本：可用生理盐水按重量体积比制备成组织匀浆液，离心取上清测定。

培养细胞、细菌、植物组织：常用PBS作为匀浆介质破碎后离心取上清测定。

五、操作流程

1、按步骤加入样本和试剂

2、漩涡混匀，95以上沸水浴40分钟，流水冷却，然后3500~4000转/分，离心10分钟，取上清待测；

3、532nm波长，1cm光径，比色测定各管吸光度值；

六、应用

用于外源Se对绵羊孕期相关微量元素、酶、MDA和NO影响的研究：

以处于怀孕期的90只蒙古羊、萨福克羊和道赛特羊为研究对象,孕期注射亚硒酸钠,通过荧光分光光度法测定Se含量、原子吸收法测定Cu、Zn、Mn、Fe含量及可见光分光光度法测定GSH-Px、T-SOD、CuZn-SOD、Mn-SOD、MDA、NO的活性或含量。

比较研究在相同的饲养管理条件下孕期注射亚硒酸钠对不同品种绵羊血清和毛中以上各指标含量和活性影响,以及发现不同品种羊孕期抗病性能的差异。

结果显示：注射亚硒酸钠组和对照组蒙古羊血清和被毛Se、Cu、Zn、Mn、Fe含量高于萨福克羊、道赛特羊,并在多数时间点差异显著（P<0.05）。

注射亚硒酸钠组各品种羊血清中Se、Cu、Zn、Mn、Fe含量在孕期均高于对照组同品种羊。注射亚硒酸钠组各品种羊血清GSH-Px活性显著增加且高于对照组同品种羊（P<0.05）。注射亚硒酸钠组各品种羊怀孕3个月时T-SOD、CuZn-SOD活性显著高于对照组同品种羊（P<0.05）。

注射亚硒酸钠组各品种羊血清Mn-SOD活力在各个时间点与对照组同品种羊比较差异均不显著（P>0.05）。蒙古羊血清中GSH-Px、CuZn-SOD活性显著高于萨福克羊、道赛特羊（P<0.05）,而血清中Mn-SOD活性则显著低于萨福克羊、道赛特羊。注射亚硒酸钠组蒙古羊在怀孕4个月、产前15d血清中MDA含量低于对照组蒙古羊（P<0.05）,而萨福克羊、道赛特羊则在孕期血清中MDA含量显著低于对照组同品种羊（P<0.05）。

在怀孕3个月、怀孕4个月、产前15d注射亚硒酸钠组各品种羊血清中NO含量显著高于对照组同品种羊（P<0.05）;蒙古羊血清中NO含量低于萨福克羊、道赛特羊（P<0.05）。

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