冻干菌株的复活及纯度检査和确认！

一、复活菌株

选择合适的培养基和培养条件(根据生产商说明）进行复活。冻干菌株的传代次数不得超过5代，从菌种保藏中心购买的冻干菌种为第0代。

1、细菌

用无菌吸管吸0.5ml 液体培养基加到冻干菌块上，吹打混匀成悬液，将全部悬液移入含有5ml合适的肉汤培养基中。将管中残留的几滴悬液移种到斜面上。在合适的条件下培养，细菌培养温度通常为25或37。多数冻干菌株会在几天后长出，但是少数菌会表现出延滞期延长的现象，需要将正常培养时间加倍。

2、噬菌体

首先应准备18h?24h的宿主细菌培养物，往冻干噬菌体中加1.0ml肉汤（视宿主细菌而定)混匀，吸0.1ml悬液到0.9ml肉汤中，依次系列稀释。每个稀释度的稀释液一滴接种到预先准备好的平板上，每平板采用3个?4个稀释度。过夜培养后可出现噬菌斑。

3、霉菌和酵母菌

用无菌吸管吸0.5 ml?1ml无菌水到冻干菌块上，将全部内容物移入装有5 ml，无菌水的试管中进行复水，2 h（或过夜）后移种到肉汤或固体琼脂上，在合适的温度下培养，真菌培养温度通常是25。少数培养物会表现出延滞期延长的现象,需要将正常培养时间加倍。

如菌株在推荐的培养基、培养温度和时间等适宜的条件下培养不生长，须灭菌处理之后方可丢弃。

二、菌种的纯度检査和确认

1、菌落形态

取复活后的培养物，在相应的鉴别平板或普通非选择性平板上划线分离，培养出单菌落，观察菌落形态是否符合，同一平板上的单菌落的大小、形状、颜色、质地、光泽等是否相似；对于出现两种或以上形态的菌株，应再分别挑取单菌落划线或稀释涂布培养，检测是否重复出现相同特征。

2、细胞形态

对数生长期的培养物的革兰氏染色反应应呈现一致性；细胞形状、大小、鞭毛、荚膜等特征应相似。

3、芽孢大小、位置、形状

形成芽孢的菌种，其芽孢大小、位置、形状应相似。

4、生化鉴定

必要时进行生化鉴定等实验。

5、污染处理

如发现菌种有污染，需要分离挑选目标菌株培养成功后将污染培养物做灭菌处理。

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