沙门、志贺菌属琼脂(SS)对照培养基的应用！

一、背景

沙门、志贺菌属琼脂(SS)对照培养基用于沙门氏菌，志贺氏菌的选择性分离培养。

沙门志贺菌属琼脂培养基(SS)成分（g/L）：牛肉粉5.0g；示月胨5.0g；乳糖10.0g；3号胆盐8.5g；枸橼酸钠8.5g；硫代硫suan钠8.5g；枸橼酸铁1.0g；中性红0.025g；煌绿0.00033g；琼脂17.0g；PH值6.9-7.1。

二、沙门志贺菌属琼脂培养基(SS)用法

称取本品63.53克，溶解于1000ml蒸馏水中，加热煮至沸，不必高压蒸汽灭菌，冷至45-50倒成平板。

志贺氏菌在SS培养基上为比较透明、直径1mm左右、表面光滑、圆形的较小菌落。进一步确认需要确证还需要做生化试验及血清凝集测定。

倒平皿（以最常用的直径为90毫米的培养皿来说）时倒15毫升左右,不需要太准确。但方便观察溶血环厚度最好在大约3、4毫米。

沙门菌属体型大多为（0.7～1.5）μm×（2.0～5.0）μm，其无芽胞，是无荚膜的革兰阴性直杆菌，除鸡沙门菌外都有周身鞭毛，能运动，多数有菌毛。

志贺氏菌属（Shigella Castellani）是一类革兰氏阴性短小杆菌，是人类细菌性痢疾最为常见的病原菌，主要流行于发展中国家，通称痢疾杆菌，耐寒，能在普通琼脂培养基上经过24小时生长，形成直径达2mm大小、半透明的光滑型菌落。无芽胞，无荚膜，无鞭毛，多数有菌毛。

三、应用

用于鸡粪中多重耐药细菌的分离鉴定及介导抗性基因水平转移元件的检测研究：

围绕质粒在环境抗生素抗性基因水平传播中所起的作用进行以下几方面的研究：

1、鸡粪中多重耐药细菌的分离鉴定及抗性检测。用含有庆大霉素、氯霉素、阿莫西林、头孢氨苄、环丙沙星、四环素、红霉素、卡那霉素这八种抗生素的培养基（LB培养基、SS培养基）,从一规模化养鸡场的鸡粪中筛选出35株多重耐药细菌。这些多重耐药细菌分布在13个不同的属,以革兰氏阴性细菌为主导。

2、在LB培养基中G-细菌与G+细菌分别占63%和37%,在SS培养基中G-细菌与G+细菌分别占87%和13%。这些细菌中对红霉素具有耐药性的最多,对阿莫西林具有耐药性的最少,它们分布于变形菌门、放线菌门以及厚壁菌门。

3、抗生素抗性基因常与重金属抗性基因定位在同一个遗传元件上,我们将没有抗生素抗性的大肠杆菌与2株耐8种抗生素细菌进行对比实验。结果表明,这些多重耐药菌对Zn、Pb、Cu、Mn的抗性比没有抗生素抗性的细菌强。

4、多重耐药细菌质粒的检测及遗传特性研究。我们提取了各多抗菌的抗性质粒并转化入模式菌株DH5a中。进一步检测发现,这些多抗菌中均有一大小在15kb左右的质粒被成功转入DH5a中。携带该质粒的DH5a可以在加有四环素、卡那霉素、头孢氨苄的LB固体培养基上生长,这表明该质粒上可能携带这三种抗生素抗性基因。

测序结果显示，该质粒大小为14591bp,将其与NCBI中现有质粒进行同源性对比分析,发现其与一植物双元穿梭表达载体p ZGA22的相似度达到99%。通过生物信息学分析,我们发现其携带编码四环素类（tet RC、tet RN）、磷酸转移酶类（NTPII、NTPIII）抗性基因以及一个能同时控制多种抗生素抗性和重金属抗性的超家族域GloEDIBRP。

结果表明：该质粒很可能具有介导环境中多种耐药基因（包括多种重金属抗性基因）发生水平转移的能力。