NA培养基(含葡萄糖)的背景与应用！

一、背景

NA培养基(含葡萄糖)用于细菌总数的测定，菌种的纯化、传代。

原理：蛋白胨和牛肉浸粉作为基础营养物质提供一般细菌生长所需的氮源、碳源和其它营养物质；氯化钠维持维持体系渗透压平衡；琼脂是培养基的凝固剂。

配制方法：称取本品33.0g于1L蒸馏水或去离子水中（可按比例增加或减少配制量），加热煮沸至完全溶解，分装，121高压灭菌15分钟,灭菌结束后请摇匀，以防琼脂沉积于器皿底部而凝固，备用。

细菌总数计数的研究已有很多，目前国标规定的方法为平板计数法，其检验方法是：在玻璃平皿内，接种一毫升水样或稀释水样于加热液化的营养琼脂培养基中，冷却凝固后在37°C培养24小时，培养基上的菌落数或乘以水样的稀释倍数即为细菌总数。

有的国家把培养温度定为35°C或其他温度，也有把培养时间定为48小时的。这种方法精度高，但耗时长，难以满足实际工作需要。为了简化检测程序、缩短检测时间，国内外学者进行了大量的快速检测方法的研究，提出了阻抗检测法、Simplate TM全平器计数法、微菌落技术、纸片法等检测方法，取得了一定的成果，但检测时间仍在4 h以上。

二、应用

用于奶牛舍空气微生物快速计数培养基的设计与优化研究：

针对奶牛场配合微生物空气采样器进行四季空气采样,并采用基质辅助激光解析飞行时间质谱法进行鉴定；

鉴定结果得出四季检出率最高的致病菌分别属于芽孢杆菌属（Bacillus）:枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）、蜡样芽孢杆菌（Bacillus cereus）;肠球菌属（Enterococcus）:粪肠球菌（Enterococcus faecalis）、屎肠球菌（Enterococcus faecium）;葡萄球菌属（Staphylococcus）:木糖葡萄球菌（Staphylococcus xylosus）、产色葡萄球菌（Staphylococcus chromogenes）;不动杆菌属（Acinetobacter）:洛菲不动杆菌（Acinetobacter lwoffii）、鲍曼不动杆菌（Acinetobacter baumannii）;棒状杆菌属（Corynebacterium）:结膜干燥棒状杆菌（Corynebacterium xerosis）。所得结果与国内外研究报道基本相一致。

研究以这9种代表性致病菌为研究对象,参考国内外计数培养基营养成分在普通营养琼脂培养基基础上添加酵母浸出粉及葡萄糖,并用胰蛋白胨替代蛋白胨,制成基底培养基。

优化后基底培养基配比为:胰蛋白胨10g/L,葡萄糖13g/L,酵母浸出粉10g/L,牛肉膏3g/L,Na Cl 5g/L。在基底培养基基础上用涂布计数法筛选出促代表菌共同生长的营养物质：甘露醇、丙酮酸钠、硫酸镁、生物素及西红柿汁。

单因素法确定各促生长物质的适宜浓度范围,再采用响应面设计方法对比促生长物质之间关系,优化各促生长物质浓度,最终确定培养基配比制成快速计数培养基,从而缩短空间微生物的计数时间并提高计数效率。

快速计数培养基添加促生长物质结果为：甘露醇、硫酸镁、丙酮酸钠、生物素及西红柿汁。以此培养基对代表菌采用涂布计数方法,恒温培养10h可计数,菌落计数可达1.28×109CFU/m L。