沙氏葡萄糖琼脂对照培养基的应用！

一、背景

沙氏葡萄糖琼脂对照培养基又名SDA培养基或者沙氏培养基，英文名字是SabouraudDextroseAgar，是通用型的真菌培养基，属于营养培养基中的一种，沙氏葡萄糖琼脂培养基属于一种改性的沙氏琼脂，主要用来培养和区分真菌，并且这种培养基一般会和抗生素一起使用，通过使用沙氏葡萄糖琼脂培养基可以将真菌和细菌材料中的病原体真菌分离出来。

沙氏葡萄糖琼脂培养基含糖量比较高，并且其PH值比较低，这种特性非常有利于真菌的生长，并且可以有效的抑制细菌的生长。通过沙氏葡萄糖琼脂培养基培养生长出的真菌可以保留其典型的形态学特征，也因此可以通过形态学特征的不同对菌种进行鉴定。

二、检验原理

葡萄糖提供碳源；动物组织的胃蛋白酶水解物和胰酪胨等量混合物提供氮源；琼脂是凝固剂。

用法：称取本品65.0g,加热搅拌溶解于1000ml纯化水中,121高压灭菌15分钟,冷却至50左右时,倾入无菌平皿,备用。

三、应用

用于申克孢子丝菌线粒体DNA型别与临床分型的关系研究：

用常规真菌学方法比较不同临床型别的申克孢子丝菌分离株的真菌学特点,并了解申克孢子丝菌线粒体DNA分型,探索其线粒体DNA分型与临床表现型之间的关系。

1、材料与方法：

实验菌株47例皮肤型孢子丝菌病患者均来自于皮损处组织块或脓汁培养的致病菌经大培养菌落形态特征和小培养镜下特点鉴定为申克孢子丝菌,其中男16例,女31例,年龄2～86岁;固定型24例,淋巴管型23例。

2、实验试剂：

菌体培养基：沙氏葡萄糖蛋白胨琼脂固体培养基改良沙氏液基

线粒体DNA提取试剂：EDTA缓冲液破壁酶Zymolyase 100T2-巯基乙醇20%SDS（十二烷基磺酸钠）Tris饱和酚氯仿、异丙醇、无水乙醇TE缓冲液

酶切及电泳试剂：Hae酶RNase A酶琼脂糖0.5×TBE储存液；

3、主要实验仪器：

蒸汽高压消毒箱（美国Tuttnauer 2540MK型）PH4000AB型电热恒温培养箱紫外凝胶成像系统（英国Gel WOrker eD,UVP GDS 8000）全能型高性能台式冷冻离心机（德国Heaeus,Biofuge Stratos）05RP-22离心机（Hitachi提供）HZO-X100震荡培养箱电泳仪（北京六一仪器厂,DYY-2型）电泳槽超声细胞破碎仪（up 50H ultraschallprozessor）；

4、实验方法：

菌株培养将47株分离菌株分别接种于沙氏葡萄糖蛋白胨琼脂（SDA）固体培养基,2周后于菌体培养及镜下观察形态。

线粒体DNA提取3、限制性酶切4、琼脂糖凝胶电泳并照相。

5、结果：菌体培养将47株孢子丝菌病分离菌株接种于沙氏葡萄糖蛋白胨琼脂固体培养基，观察发现47株申克孢子丝菌菌株基本一致：

（1）SDA固体培养基示:1周时呈直径约0.5cm菌落,淡褐色或白色平滑酵母样菌落,表面湿润成膜状。2周时菌落直径约2cm,中央凹陷,周边隆起,出现皱褶,呈深褐色。

（2）镜下示:细长分隔菌丝,分生孢子柄多与菌丝呈直角生长,顶端着生梨形或卵圆形孢子,呈梅花瓣状分布,并见孢子沿菌丝侧生。