人胸腺上皮细胞的应用与使用方法！

一、背景

人胸腺上皮细胞分离自胸腺组织采用胰蛋白酶-胶原酶混合消化法结合差速贴壁法，并通过上皮细胞专用培养基培养筛选制备而来。分离的人胸腺上皮细胞经Cytokeratin-18免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

胸腺是机体重要的淋巴器官，其功能与免疫紧密相关，是T细胞分化、发育、成熟的场所，还可以分泌胸腺激素及激素类物质，具有内分泌技能的器官。胸腺上皮细胞和胸腺细胞是胸腺微环境的重要组成部分，其外，胸腺上皮细胞组成了胸腺细胞不同发育阶段的三维结构，根据其在胸腺中位置不同，可分为皮质胸腺上皮细胞和髓质胸腺上皮细胞。胸腺细胞的发育和成熟是通过在胸腺皮质和髓质上皮细胞的迁移过程中相互作用完成的。

此外，胸腺细胞通过皮质胸腺上皮细胞介导的阳性选择和髓质胸腺上皮细胞介导的阴性选择发育为能够识别和耐受自身主要组织相容复合体和自身抗原的成熟T淋巴细胞。胸腺上皮细胞是构成胸腺微环境的主要成份，其形态、分布和功能多样。表面抗原表达具有高度异质性，与胸腺细胞结合成不同类型复合体，部分胸腺上皮细胞相互排列构成囊泡样结构。电镜观察，可把胸腺上皮细胞分为3-6型，用抗胸腺上皮细胞单克隆抗体荧光染色可把胸腺上皮细胞分为9种类型。

二、使用方法

人胸腺上皮细胞是一种贴壁细胞，细胞形态呈上皮细胞样，在Procell技术部标准操作流程下，细胞可传1-2代；建议您收到细胞后尽快进行相关实验。收到细胞后，请按照以下方法进行操作。

1、取出T25细胞培养瓶，用75%酒精消毒瓶身，拆下封口膜，放入37、5%CO2、饱和湿度的细胞培养箱中静置3-4h，以稳定细胞状态。

2、贴壁细胞消化

1）吸出T25细胞培养瓶中的培养基，用PBS清洗细胞一次；

2）添加0.25%胰蛋白酶消化液1mL至T25培养瓶中，轻微转动培养瓶至消化液覆盖整个培养瓶底后，吸出多余胰蛋白酶消化液，37温浴1-3min；倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后，再加入5ml完全培养基终止消化；

3）用吸管轻轻吹打混匀，按传代比例接种T25培养瓶传代，然后补充新鲜的完全培养基至5mL，置于37、5%CO2、饱和湿度的细胞培养箱中静置培养；

4）待细胞完全贴壁后，培养观察；之后按照换液频率更换新鲜的完全培养基。

三、应用

用于人胸腺基质淋巴细胞生成素在人上皮性卵巢癌中的表达研究：

人胸腺基质淋巴细胞生成素（hTSLP）是一种造血细胞因子,可诱导炎症局部形成Th2型优势,促进调节性T细胞分化发育,并参与过敏性疾病的发病。hTSLP在上皮性卵巢肿瘤中是否存在,在肿瘤免疫逃逸中有何作用,本实验将作初步评价。

分析hTSLP在人上皮性卵巢癌组织、人上皮性卵巢肿瘤细胞系中的表达;分析人卵巢肿瘤细胞系细胞是否通过分泌TSLP形成免疫耐受的肿瘤微环境。

方法：免疫组织化学方法分析正常卵巢、上皮性卵巢肿瘤组织的TSLP表达情况。免疫细胞化学方法分析人浆液性乳头状囊腺癌细胞系SKOV3 TSLP表达。ELISA检测上述细胞系细胞培养上清中TSLP的分泌浓度。

结果：正常卵巢上皮细胞低或不表达TSLP,浆液性卵巢腺癌细胞胞质高表达TSLP,粘液性卵巢癌细胞非粘液区胞质高表达TSLP。各种卵巢组织中血管平滑肌均低表达TSLP。人上皮性卵巢肿瘤细胞系SKOV3高表达TSLP;但单独培养上清中未检测到分泌性TSLP。

结论：浆液性及粘液性上皮性卵巢癌细胞胞质高表达TSLP,与正常卵巢细胞有显著差异。人上皮性卵巢肿瘤细胞系SKOV3胞质高表达TSLP,其单独培养不分泌TSLP。