ACHN人肾癌细胞的应用及复苏操作要点！

一、背景

ACHN人肾癌细胞是剪切过的人腺病毒5（Ad5）转染的人胚肾细胞形成的永生化细胞。

此细胞包含并表达转染的Ad5基因。早期报道中指出该细胞基因组中含有腺病毒5（Ad5）基因组的左侧端和右侧端的DNA，但是现在明确了只存在其左侧端的DNA。

经过对Ad5的插入点的克隆测序发现，Ad5的1～4344位线性核苷酸整合入细胞染色体19q13.2。该细胞为人类腺病毒载体扩增的宿主。

二、细胞复苏操作要点

1、将培养基在37水浴锅预热；准备一个15mL无菌的离心管，加入8mL预热培养基。

2、将冻存细胞从液氮罐中取出，快速放入37水浴锅中复温（可准备一洁净的烧杯，装满37的水，细胞冻存管取出后迅速放入烧杯内，再逐步转移到水浴锅中）。轻轻晃动冻存管，使细胞能在1~2min内完全解冻，使细胞能尽快通过最易受损的温度段（-5~0）。注意冻存管管口不能没入水中，BIU-87(人膀胱癌细胞)避免引起污染。

3、用75%酒精擦拭冻存管后再置于超净台内，将管内细胞转移至准备好的离心管内，轻轻吹打液体，使细胞均匀分散，降低DMSO浓度，吹打时避免产生气泡。用新鲜培养基洗管壁2次，均转移至离心管内。

4、800rpm离心5min，弃上清，加入新鲜的培养基，吹打制成细胞悬液。

5、将细胞悬液转移至T25细胞瓶内，补加适量的培养基，轻轻晃动细胞瓶使细胞分布均匀，放入温箱内培养。

6、第二天观察细胞贴壁生长情况，换新鲜培养基以去除死细胞。继续培养，待细胞长至80~90%汇合时正常传代。一般刚复苏的细胞需经过2~3次传代，细胞活力恢复后才能进行后续的实验。

三、应用

用于益气解毒方药物血清对人肾癌细胞ACHN增殖及Jagged1影响的实验研究：

以ACHN人肾癌细胞为研究对象,研究不同浓度及不同作用时间下益气解毒方药物血清对ACHN人肾癌细胞增殖、凋亡及对其Notch信号通路中Jagged1配体mRNA表达的影响。

方法：（1）采用CCK8法观察高、中、低浓度益气解毒方药物血清及空白血清作用ACHN人肾癌细胞24h、48h、72h后对ACHN人肾癌细胞的生长抑制影响。

（2）利用流式细胞技术检测不同浓度益气解毒方药物血清干预24h后ACHN人肾癌细胞凋亡情况。

（3）应用RT-qPCR方法检测不同浓度益气解毒方药物血清作用24h后ACHN细胞Jagged1基因的相对表达含量的影响。

结果：（1）益气解毒方药物血清对ACHN细胞的增殖有抑制作用且呈时间及浓度依赖性。

（2）益气解毒方药物血清可促进ACHN细胞的凋亡呈浓度依赖性。

（3）益气解毒方能够下调ACHN细胞Jagged1基因的相对表达含量且呈浓度依赖性。

结论：益气解毒方药物血清可抑制ACHN人肾癌细胞的增殖,并诱导凋亡其作用机制可能与下调Jagged1配体基因的表达有关。