卵磷脂胆固醇酰基转移酶(LCAT)ELISA试剂盒的应用！

一、背景

卵磷脂胆固醇酰基转移酶(LCAT)ELISA试剂盒用于体外定量检测血清、血浆、组织、细胞上清及相关液体样本中人卵磷脂胆固醇酰基转移酶（LCAT）的含量。

二、实验原理

试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。往预先包被人卵磷脂胆固醇酰基转移酶（LCAT）捕获抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的人卵磷脂胆固醇酰基转移酶（LCAT）呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。

三、操作步骤

1、从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4。

2、设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL；

3、样本孔中加入待测样本50μL；空白孔不加。

4、除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体100μL，用封板膜封住反应孔，37水浴锅或恒温箱温育60min。

5、弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液（350μL），静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机洗板）。

6、每孔加入底物A、B各50μL，37避光孵育15min。

7、每孔加入终止液50μL，15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值。

四、应用

用于卵磷脂胆固醇酰基转移酶基因单核苷酸多态性与冠心病易感性的关联研究：

在哺乳动物中，卵磷脂胆固醇酰基转移酶(lecithin：cholesterol acyltransferase，LCAT)是胆固醇逆向转运回肝代谢的关键酶，参与维持血浆胆固醇的稳态平衡，调节高密度脂蛋白(high density lipoprotein HDL)等脂蛋白代谢，具有抗动脉粥样硬化功能，是CAD的易感基因之一。

随着人类基因组测序的完成，研究与疾病表型相关的序列变异已成为医学遗传学的一个主要课题。

通过对中国汉族以D患者和正常个体中LCAT基因已知cSNP的研究和未知cSNP的筛选，比较这些cSNP在患者和正常对照人群中的分布，揭示LCAT基因cSNP与脂代谢紊乱及冠心病的关系，以期阐明其在CAD发生发展中的作用。

首先，采用聚合酶链反应一限制性片断长度多态性方法研究了我国正常人和CAD患者中3个已知eSNp位点(6o8C>T，91 IT>C和1188C>T)的分布频率，并初步探讨它们与脂代谢和冠心病的关系。

其次，运用DHPLC技术筛查忧AT基因外显子区域未知的csNP，进一步通过测序和PCR一RFLP方法验证后，对这些cSNP与脂代谢和以D的相关性进行了统计学分析。

对3个己知cSNP位点的研究结果显示，在中国人群中仅存在6OSC>T多态位点。在对照组中，两种等位基因的频率分别为97.13%(608C)和2.87%(608T)，而在CAD患者组中为99.26%(608C)和0.7钱(608T)，等位基因频率分布符合Hardy哪einberg平衡。经卡方检验，该位点等位基因(尸=0.034)和基因型频率(尸二0.032)分布在对照组和患者组间差异显著，以D组6OST频率显著低于对照组，提示L以T基因的608C>T多态位点可能与以D相关。