PC-12(未分化)细胞专用培养基的应用！

一、背景

PC-12(未分化)细胞专用培养基可保持PC-12(未分化)细胞最佳的生长状态。本产品中已包含PC-12(未分化)细胞生长所需的各种成分，无需添加任何成分，可直接用于PC-12(未分化)细胞的体外培养。

PC-12(未分化)细胞是来自能移植的雄性大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤。PC-12(未分化)细胞表达神经生长因子(NGF)受体，NGF可诱导产生神经表型。PC-12(未分化)细胞不合成肾上腺素。

二、细胞复苏

1）从液氮中取出细胞冻存管（注意：佩戴防爆管面具），快速将其置入37水浴中解冻，直至冻存管中无结晶，然后用75%的酒精擦拭冻存管外壁；

2） 将冻存管中的细胞移至含5ml完全培养基的15ml离心管中，1000rpm离心5min；

3）弃上清，沉淀用5ml完全培养基重悬，接种25cm2培养瓶，于37，5%CO2细胞培养箱中培养；

4）第二天，换用新鲜完全培养基继续培养

三、细胞传代

1）细胞生长至覆盖培养瓶的80%面积时，弃25cm2培养瓶中的培养液，用PBS清洗细胞一次；

2）添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml至培养瓶中，倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后加入完全培养液终止消化，再轻轻吹打细胞使之脱落，然后将悬液转移至15ml离心管中，1000rpm离心5min；

3）弃上清，沉淀细胞用12ml完全培养基重悬，然后按1:2比例进行分瓶传代，后放入37，培养箱中培养；

4）待细胞完全贴壁后，观察培养结果，之后进行换液培养或传代。

四、应用

用于IL-22在大鼠嗜铬瘤细胞PC12中生物学作用的研究：

白细胞介素22（Interleukin-22,IL-22）属于IL-10细胞因子家族,由特殊的免疫细胞（包括Th22、Th1、Th17、NK、NKT细胞以及淋巴组织诱导细胞）产生。IL-22通过配体结合链IL-22R1和IL-10R2组成的受体复合物启动信号通路,其中IL-22R1是IL-22的特异性受体。

IL-22的靶细胞包括来自皮肤、肝脏和肾脏以及某些呼吸道和胃肠道系统的组织细胞,不包括造血系统的细胞。IL-22主要介导白细胞和上皮细胞之间的相互作用。但也有研究发现,在小鼠的大脑中可检测到IL-22的表达,并且大鼠嗜铬瘤细胞PC12可对IL-22的刺激产生反应。

研究IL-22在大鼠嗜铬瘤细胞PC12中的生物学作用。取得了以下主要研究结果：1、在RT-PCR检测到PC12细胞表面有IL-22R1表达的预实验的基础上,以100ng/mlIL-22刺激PC12细胞不同的时间,采用western blot方法检测相关信号通路蛋白的活化的情况。

结果显示IL-22激活了Stat3酪氨酸的磷酸化,对Stat3丝氨酸的磷酸化没有明显的影响。此外,IL-22活化p38MAPK通路,抑制Erk/MAPK通路的活化,没有检测到JNK的活化。同时还观察到IL-22能促进Akt通路的活化。

2、PC12细胞饥饿48h后,60-70%细胞发生死亡。本研究在饥饿细胞的同时加入了不同浓度的IL-22,采用MTT法统计细胞的相对数目。

结果显示50ng/ml100ng/ml的IL-22可以保护饥饿的PC12细胞存活。通过MTT法和western blot法检测在各通路的抑制剂的作用下检测IL-22对饥饿PC12细胞存活的保护作用是否被抑制,发现Jakl/Stat3和Akt途径在保护饥饿PC12细胞的存活的过程中发挥作用,而p38MAPK通路在此过程中不发挥作用。在饥饿细胞48h的同时,加入100ng/mlIL-22,发现IL-22可增强细胞的自噬。

3、MTT法结果表明IL-22不促进PC12细胞的增殖。无论是统计神经突触的数目,还是检测生长相关蛋白GAP-43勺表达情况,均发现IL-22对PC12细胞的分化无影响。但IL-22可能下调NGF引起的PC12细胞突触的生长和细胞分化相关蛋白（GAP-43）的表达。