小鼠成纤维细胞接收后的操作流程与注意事项！

一、细胞简介

平台编号：Bio-54037

规格：1×10cells/T25培养瓶

拉丁属名：NCTC clone 929 [L cell, L-929, derivative of Strain L]

细胞名称：小鼠成纤维细胞

种属：小鼠

年龄（性别）：雄；100日龄

组织来源：组织：皮下结缔组织；疏松结缔组织及脂肪 品系：C3H/An

生长特性：贴壁

细胞形态：成纤维细胞样

背景描述：NCTC clone 929 [L cell, L-929, derivative of Strain L]细胞是1948年3月建立的细胞系L的克隆株；细胞系L是最早建立的连续培养细胞系之一，而NCTC clone 929 [L cell, L-929, derivative of Strain L]是最早的克隆株。从一只100日龄的雄性C3H/An小鼠的皮下疏松结缔组织入脂肪组织中建立了亲本细胞系L，第95代的细胞系L使用毛细管法分离单细胞建立了NCTC clone 929 [L cell, L-929, derivative of Strain L]。

生长培养基：MEM(货号:PM150410)＋10% FBS(货号:164210-500)＋1% P/S(货号:PB180120)

培养条件：气相：空气，95%；CO2，5% 温度：37

注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用

二、小鼠成纤维细胞的生长条件

培养基：90%高糖DMEM+10S

血清：10%  FBS (Diagnovum )

温度：37

空气条件：5% CO2，95% AIR

冻存条件：培养基50%、血清40%、DMSO 10%

三、小鼠成纤维细胞接收后的操作流程与注意事项

1、细胞收到后建议在培养箱稳定4小时左右再依据细胞密度，换液培养或传代。

2、如果细胞为贴壁细胞，而收到时呈悬浮或者部分悬浮的状态，请将悬浮的细胞及时离心，加15%血清的完全培养基到新的培养皿/瓶中继续培养3天；同时原培养瓶中剩下的贴壁细胞更换为15%血清的完全培养基，培养2-3天。若3天后细胞都没有出现增殖而是继续脱落死亡，请及时联系实验室，技术人员会跟进解决。

3、贴壁细胞生长缓慢：适当提高血清浓度（最高不超过20%），或可根据该细胞生长密度，考虑胰酶消化后，转移到新的培养瓶继续培养。

4、生长不均：贴壁细胞若出现生长不均，成岛状生长，可将细胞进行消化，重新打散细胞，加入新鲜培养基进行培养。

四、小鼠成纤维细胞的常规培养传代流程（请严格遵守无菌操作）

1、吸出原培养瓶中的培养基，PBS缓冲液润洗细胞两次，加1~2 ml 0.25% EDTA的胰酶消化（注意把握消化时间，通常控制在1~2min）。

2、镜下观察消化情况，在细胞边缘缩小，贴壁运动时（不建议消化到细胞漂浮）去掉胰酶，加6~8ml 完全培养基，轻轻吹打细胞层，尽量把细胞层吹落、吹散。

3、取出部分细胞悬液转移到新的培养皿/瓶中，添加适当的完全培养基，于培养箱中培养。

4、注意培养基PH值变化情况，定期换液，待细胞密度达到70-80%时重复传代操作或者冻存。

五、小鼠成纤维细胞特别注意：（如使用公共实验室或初次接触细胞培养，建议添加双抗培养）

1、收到细胞后请尽快更换为含10% FBS的新鲜培养基，切勿使用原瓶中运输用培养基。

2、如签收时出现培养瓶壁破裂，漏液等情况请及时拍照并联系实验室。

3、细胞任何售后问题，均需拍照存档并及时联系客服。