清酒酵母的培养方法与操作流程及使用范围！

清酒酵母是Saccharomyces属的微生物，原产地为中国。利用葡萄糖、半乳糖、蔗糖、麦芽糖、棉子糖；不利用可溶性淀粉、D-木糖、D-阿拉伯糖、L-鼠李糖、核糖醇、柠檬酸、肌醇。主要用途为分类；研究；教学，具体用途为苹果酸。

一、菌种简介

平台编号：Bio-33961

规格：培养物

拉丁属名：Saccharomyces Sake

中文名称 ：清酒酵母

拉丁属名 ：Saccharomyces

种名加词 ：sake K. Yabe

收藏时间* ：2008-12-4

来源历史 ：中国林业科学研究院林业研究所

原产国 ：中国

资源归类编码 ：15151113126

模式菌株 ：非模式菌株

主要用途 ：研究；教学

具体用途 ：饲料、食品发酵

生物危害程度 ：四类

致病对象 ：无

培养基信息 ：培养基编号: 14 培养基名称: PDA

培养温度 ：25

资源保护类型 ：培养物

保藏方法 ：定期移植法

共享方式 ：资源交换性共享

提供形式 ：斜面培养物

实物状态 ：有实物

用途：饲料、食品发酵

注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准）

二、培养方法

培养基 乳酸菌培养基 ：Lacto-casein peptone (乳酪蛋白胨) 10g Beef extract 10g Yeast extract (酵母膏) 5g Glucose (葡萄糖) 5g Tween (吐温) 80 1g K2HPO4 2g Na-acetate (醋酸钠) 5g Diamine citrate (柠檬酸二胺) 2g MgSO4.7H2O 0.2g MnSO4.H2O 0.05g Distilled water (蒸馏水) 1000m pH 6.5-6.8。121，15min。

三、传代方法

冻干管：75%酒精擦拭管壁，后用砂轮在冻干管壁划两圈，掰断，用200μL无菌水或培养基充分溶解，平板涂布，活化培养。斜面：试管口用75%酒精擦拭后，火焰灼烧，后用无菌接种铲切块，挑取接入平板或斜面，培养。

四、使用范围

（1）合成培养基。合成培养基的各种成分完全是已知的各种化学物质。这种培养基的化学成分清楚，酿酒酵母菌组成成分精确，重复性强，而且微生物在这类培养基中生长较慢。如高氏一号合成培养基、察氏（Czapek）培养基等。

（2）天然培养基。由天然物质制成，如蒸熟的马铃薯和普通牛肉汤，前者用于培养霉菌，后者用于培养细菌。这类培养基的化学成分很不恒定，也难以确定，但配制方便，营养丰富，培养效果好，所以常被采用。

（3）半合成培养基。在天然有机物的基础上适当加入已知成分的无机盐类，或在合成培养基的基础上添加某些天然成分，如培养霉菌用的马铃薯葡萄糖琼脂培养基。这类培养基能更有效地满足微生物对营养物质的需要。

五、操作流程

菌株复苏：（按三区划线法将留菌管内的原始菌株进行复苏）

1)所有菌株，显色培养基分4区，每区一株，标明菌株号、菌种名常用缩写如下：

cal: 白念珠菌 cgl：光滑念珠菌 cpa: 近平滑念珠菌 ctr: 热带念珠菌 ckr: 克柔念珠菌 cne: 新型隐球菌，其他菌种标记全名。

2)隐球菌除传显色培养基以外，另传1/2块血平皿上述菌株统一37oC孵育48h

菌种鉴定：（48h后观察结果）。

六、保藏方法

1、传代培养保藏法

又有斜面培养、穿刺培养、疱肉培养基培养等（后者作保藏厌氧细菌用），培养后于4-6冰箱内保存。

2、液体石蜡覆盖保藏法

是传代培养的变相方法，能够适当延长保藏时间，它是在斜面培养物和穿刺培养物上面覆盖灭菌的液体石蜡，一方面可防止因培养基水分蒸发而引起菌种死亡，另一方面可阻止氧气进入，以减弱代谢作用。

3、载体保藏法

是将微生物吸附在适当的载体，如土壤、沙子、硅胶、滤纸上，而后进行干燥的保藏法，例如沙土保藏法和滤纸保藏法应用相当广泛。

4、寄主保藏法

用于目前尚不能在人工培养基上生长的微生物，如病毒、立克次氏体、螺旋体等，它们必须在生活的动物、昆虫、鸡胚内感染并传代，此法相当于一般微生物的传代培养保藏法。病毒等微生物亦可用其他方法如液氮保藏法与冷冻干燥保藏法进行保藏。

5、冷冻保藏法

可分低温冰箱（-20-30，-50-80）、干冰酒精快速冻结（约-70）和液氮（-196）等保藏法。

6、冷冻干燥保藏法

先使微生物在极低温度（-70左右）下快速冷冻，然后在减压下利用升华现象除去水分（真空干燥）。有些方法如滤纸保藏法、液氮保藏法和冷冻干燥保藏法等均需使用保护剂来制备细胞悬液，以防止因冷冻或水分不断升华对细胞的损害。保护性溶质可通过氢和离子键对水和细胞所产生的亲和力来稳定细胞成分的构型。保护剂有牛乳、血清、糖类、甘油、二甲亚砜等。