黄绿蜜环菌的培养与保存方法及实验内容！

黄绿蜜环菌[Armillaria luteo-virens（Aalb.et Schw:Fr.）Sacc.]，又名黄蘑菇，皇菇、黄环菌，是一种名贵食用菌，也是一种重要的高原生物资源，主要分布于青海、西藏、四川、甘肃，其海拔分布范围约为3000-4300m，集中分布于海拔3200~3800m的草甸上，主产于海北(祁连、海晏、刚察)，黄南(泽库、河南)，海南(共和、贵德、兴海)，果洛(玛沁、甘德、久治)，玉树；其中以青海湖畔至祁连一带纯天然无污染地区的黄蘑菇最为质优。

菌种简介

平台编号：Bio-31867

规格：培养物

拉丁属名：Floccularia Luteovirens F. Luteovirens

中文名称 ：黄绿蜜环菌

拉丁属名 ：Floccularia

种名加词 ：luteovirens f. luteovirens (Alb. & Schwein.) Pouza

收藏时间* ：2006-11-8

来源历史 ：中国林科院亚热带林业研究所

原产国 ：中国

资源归类编码 ：15151700000

模式菌株 ：非模式菌株

主要用途 ：研究；生产

特征特性 ：子实体中等大。菌盖直径5-11cm，cm，扁半球形至平展，硫黄色，干后近白色，具纤毛状鳞片，边缘内卷 。菌肉白色，厚。菌褶近似菌盖色，稍密，弯生，不等长。菌柄柱形，长3.5-10cm，粗1.2-2.5cm，白色或带黄色，内实，菌环以下具黄色鳞片，基部往往膨大。菌环生柄的上部，黄色。孢子印白色。孢子无色，光滑，椭圆形，6-7.2μm×4-4.5μm。

生物危害程度 ：四类

致病对象 ：无

分离基物 ：子实体

采集地区 ：山东单县

采集具体地点 ：林地

培养基信息 ：培养基编号: 17 培养基名称: 综合PDA琼脂

培养温度 ：28

资源保护类型 ：培养物

保藏方法 ：定期移植法

共享方式 ：资源交换性共享

提供形式 ：斜面培养物

实物状态 ：有实物

用途：研究

注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准）

菌种的培养

1、菌种是指食用菌菌丝体及其生长基质组成的繁殖材料。菌种分为母种（一级种）、原种（二级种）和栽培种（三级种）三级。工业发酵的有用菌种，其筛选步骤包括菌种分离、初筛和复筛。

2、挑选具有某种能力的有用菌种，也称种子制备，是指菌种在一定条件下，经过扩大培养成为具有一定数量和质量的纯生产菌种的制备过程。以作接入发酵罐中进一步扩大菌体量及合成产物之用。

3、种子制备包括孢子制备和菌丝体制备 菌种制备。

4、保存在沙土管或冷冻管中的生产菌种，用无菌手续挑取少许，接入琼脂斜面培养基上，在25（或较高温度）下培养5～7天（或较长时间。所得孢子还需进一步用较大表面积的固体培养基以获得更多孢子（对于霉菌类孢子制备，多数采用大米、小米之类的天然培养基）。

5、将培养成熟的斜面孢子制成悬浮液，接种到扁瓶固体培养基上，于25～28培养14天。将成熟的扁瓶孢子于真空中抽干，使水分降至10%以下，并放入 4冰箱中备用。一次制得的孢子瓶可在生产上延续使用半年左右。

6、如果有些生产菌种不产孢子，如赤霉素产生菌或产孢子不多的，则可采用摇瓶液体培养制得菌丝体，作种子罐的种子。种子罐的目的是使接入有限的孢子或菌丝体迅速发芽、生长、繁殖成大量菌体。其中的培养基组分应是易于被菌体利用的碳源（如葡萄糖）和氮源（如玉米浆），及无机盐(如磷酸盐)等。作为发酵罐的种子应生命力旺盛、染色深、菌丝粗壮，无杂菌及异常菌体。接种量一般在10%～20%。

实验内容

1、称量→溶化→调pH→过滤→分装→加塞→包扎→灭菌→无菌检查

2、干热灭菌：装入待灭菌物品→升温→恒温→降温→开箱取物

3、高压蒸汽灭菌：加水→装物品→加盖→加热→排冷空气→加压→恒压→降压回零→排汽→取物→无菌检查

4、过滤除菌：组装灭菌→连接→压滤→无菌检查→清洗灭菌

保存方法

1、传代保存法：培养基的浓度不宜过高，营养成分不宜过于丰富，尤其是碳水化合物的浓度应在可能的范围内尽量降低。培养温度通常以稍低于最适生长温度为好。若为产酸菌种，则应在培养基中添加少量碳酸钙。

2、液体石蜡覆盖保存法：该法较前一种方法保存菌种的时间更长，适用于霉菌、酵母菌、放线菌及需氧细菌等的保存。

3、悬液保存法：

蒸馏水保存法：适用于霉菌、酵母菌及绝大部分放线菌，将其菌体悬浮于蒸馏水中即可在室温下保存数年。本法应注意避免水分的蒸发。

糖液保存法：适用于酵母菌，如将其菌体悬浮于10%的蔗糖溶液中，然后于冷暗处保存，可长达10年。除此之外，也可使用缓冲液或食盐水等进行保存。

4、载体保存法：土壤保存法；砂土保存法；硅胶保存法；磁珠保存法；麸皮保存法；纸片(滤纸)保存法。

5、常用的冷冻保存法：

低温冰箱保存法(-20、-50或-85)：低温冷冻保存时使用螺旋口试管较为方便，也可在棉塞试管外包裹塑料薄膜。保存时菌液加量不宜过多，有些可添加保护剂。此外，也可用φ5mm的玻璃珠来吸附菌液，然后把玻璃珠置于塑料容器内，再放入低温冰箱内进行保存的。

干冰保存法(-70左右)：即将菌种管插入干冰内，再置于冰箱内进行冷冻保存。

液氮保存法(-196)：是适用范围最广的微生物保存法。