单胺氧化酶(MAO)测定试剂盒(紫外比色法)的应用！

一、背景

单胺氧化酶(MAO)测定试剂盒(紫外比色法)可测动物组织中MAO活力。肌酸激酶CK催化三磷酸腺苷和肌酸，生成磷酸肌酸，后者很快全部水解为磷酸，此时三磷酸腺苷和二磷酸腺苷仍稳定，加入钼酸铵可生成磷钼酸，可进一步还原成钼蓝，根据生成无机磷的量可算出酶的活力。

测定MAO主要用于研究肝硬化。肝硬化时MAO活性常明显增高,阳性率可达80%以上。其活性与用腹腔镜观察肝脏表面结节形成的过程相平行,增高程度与组织学检查肝脏的结蹄组织增生和小叶结构的扭曲密切相关。暴发性肝炎时由于本酶从坏死的肝细胞逸出可以增高,慢性肝炎活动时有增高倾向.糖尿病、甲状腺机能亢进,肢端肥大症,心力衰竭引起的肝瘀血等疾病也有增高倾向。

MAO在体内分布很广，以肝、肾、脑组织中含量最多。组织中MAO主要存在于线粒体上，和膜紧密结合；少量存在于细胞质可溶成份中，血清中MAO是水溶性，与线粒体上的MAO不同，而和结缔组织中的MAO相似。MAO能促进结缔组织的成熟，在胶原形成过程中，MAO参与胶原成熟最后阶段的架桥形成，使胶原和弹性硬蛋白结合。

产品优点如下：

1、稳定性好：试剂盒2～8存放6个月有效。

2、再现性好：变异系数CV=1.5%。

3、回收试验：X=102%。

4、受外界影响因素小：干扰因素少，重复性强。

5、测试面广：可测各种动物血清(浆)、组织，效果均佳。

二、应用

用于EGCG类似物对乙酰胆碱酯酶和单胺氧化酶的抑制活性评价及分子模拟研究：

对EGCG及其类似物生物活性的研究进展进行了系统的阐述。主要是结合生物活性评价和分子模拟手段对EGCG类似物对AChE及MAO的抑制活性及其相互作用机制进行研究。

探究EGCG类似物对AChE的抑制活性及相互作用机制。首先采用Ellman法测定了85个EGCG类似物对AChE的抑制活性,结果表明有3个小分子化合物2159-3796、0908-0110、5586-2478对AChE具有较高的抑制活性,半数抑制浓度(IC50)分别为7.89μM、30.13μM、74.6μM。同时采用了微量热泳动（MST）法研究活性最高的化合物2159-3796与AChE的亲和力常数Kd值,测得2159-3796与AChE的Kd值为80.33μM。

然后采用分子动力学模拟与结合自由能计算的方法来探索2159-3796与AChE的相互作用机制并设计石杉碱甲（Huperzine A,hupA）与乙酰胆碱酯酶的复合物体系作为对照体系。分子动力学模拟的结果表明hupA的头部羰基氧原子能很好的与AChE的Ser200、Ala201、Gly118、Gly119等酯化活性位点的残基间形成的稳定的氢键网络从而来抑制AChE的活性,但是从2159-3796与AChE的结合模式来看由于空间位阻作用2159-3796不能与Ser200、Ala201、Gly118、Gly119很好的形成氢键网络,这个差异决定了两个化合物活性的不同。

这为后期设计活性更高的AChE的抑制剂提供了依据。

探究了EGCG类似物对MAO的抑制活及对MAO-A、MAO-B的选择性以及活性化合物对MAO-A、MAO-B的选择性机制。首先,采用了Holt法对85个EGCG类似物对MAO的抑制活性进行了筛选,结果表明有四个化合物8019-8452、8005-6325、8018-9337、8018-5599对MAO的抑制活性较高,其IC50值均在100μM以下。在此基础上采用改进的Holt法研究了四个化合物对MAO-A、MAO-B的选择性,选择性实验结果表明8019-8452小分子表现出了对MAO-B具有较高的选择性其他三个小分子均对MAO-A具有较高的选择性。

然后采用分子动力学模拟和结合自由能计算的方法研究了活性化合物对MAO-A、MAO-B的选择性机制。分子动力学模拟及结合自由能计算的的研究结果表明Gln215是对MAO-A抑制活性的选择性的关键残基,辅因子FAD是对MAO-B的选择性关键残基。同时积较小的分子更加灵活容易与MAO-B结合口袋底部FAD形成相互作用从而更加倾向于选择性抑制MAO-B。

对比四个小分子化合物结构发现苯甲酸甲酯骨架是一个对MAO有抑制作用且对MAO-A选择性较高的一个母核结构,这些实验结果对后期合理设计活性更高选择性更好的的MAO的抑制剂提供了一定的理论依据。

以上实验结果是借助于生物实验手段结合分子动力学模拟的方法来探究EGCG类似物对AChE和MAO的抑制活性及相互作用机理,实验结果将有助于进一步去发现AChE和MAO的抑制剂,同时也有助于进一步开发和研究EGCG类似物的生物活性。