小鼠白介素2 ELISA试剂盒的使用方法！

 

小鼠白介素-2 (IL-2)ELISA 试剂盒，用于血清、血浆、细胞培养上清液和其它生物体液内。

 

一、原理

 

本实验采用双抗体夹心  ABC-ELISA 法。用抗小鼠 IL-2 单抗包被于酶标板上，标准品和样品中的 IL-2与单抗结合，加入生物素化的抗小鼠 IL-2 ，形成免疫复合物连接在板上，辣根过氧化物酶标记的 Streptavidin 与生物素结合，加入底物工作液显蓝色，最后加终止液硫酸，在 450nm 处测 OD 值，IL-2 浓度与 OD 值成正比，可通过绘制标准曲线求出标本中IL-2 浓度。

 

二、试剂盒组成 （ 2-8 保存）

 

 

 

三、准备试剂与收集血样

 

1、收集标本：血清、血浆（EDTA 、柠檬酸盐、肝素抗凝）、细胞培养上清液、组织匀浆等尽早检测， 2-8 保存48 小时；更长时间须冷冻（ -20   或 -70    ）保存，避免反复冻融。

 

2、标准品液配制：使用前加入1ml 蒸馏水 混匀，配成 2 0ng/ml 的溶液 。 设标准管 8 管，第一管加标本稀释液 900ul ，第二至第八管加入标本稀释液 500ul。在第一管中加入 2 0ng/ml 的标准品溶液 100ul 混匀后用加样器吸出 500ul ，移至第二管 。如此反复作对倍稀释，从第七管中吸出 500ul 弃去。第八管为空白对照。

 

3、10× 标本稀释液用蒸馏水作 1: 1 0 倍稀释（ 示例： 1ml浓稀释液 +9ml 蒸馏水）。

 

4、洗涤液：用重蒸水 1:20 稀释（示例：1ml 浓缩洗涤液加入 19ml 的重蒸水）

 

四、检测程序

 

1、加样：每孔各加入标准品或待测样品 100ul ，将反应板充分混匀后置 37 120 分钟。

 

2、洗板：用洗涤液将反应板充分洗涤 4-6 次，向滤纸上印干。

 

3、每孔中加入第一抗体工作液10 0ul 。将反应板充分混匀后置 37 6 0 分钟。

 

4、洗板：同前。

 

5、每孔加酶标抗体工作液100ul 。将反应板置 37 3 0 分钟。

 

6、洗板：同前。

 

7、每孔加入底物工作液100ul ，置 37 暗处反应15 分钟。

 

8、每孔加入100ul 终止液混匀。

 

9、30分钟内用酶标仪在 45 0 nm 处测 吸光值。

 

五、结果计算与判断

 

1、所有 OD 值都应减除空白值后再行计算。

 

2、以标准品20 00 、100 0 、500 、 250 、 125 、 62.5 、 31.2 、 0  pg /ml 为横坐标， OD 值为纵坐标，在坐标纸上作图，画出标准曲线。

 

3、根据样品 OD 值在该曲线图上查出相应 IL-2 含量。

 

六、试剂盒性能

 

1、灵敏度 ：最小的IL-2 检测浓度小于 15 pg/ml。

 

2、特异性：可同时检测重组或天然的小鼠 IL-2 。不与小鼠其它细胞因子有交叉反应。

 

3、重复性：板内、板见变异系数均小于10％。

 

七、注意事项

 

1、以上标准孔及待测样品均建议做复孔，每次测定应同时做标准曲线。

 

2、洗涤过程很关键。洗涤不充分将导致精确度误差及 OD 值错误地升高。

 

3、板条开封后剩余板条要再封好，保持板条干燥。

 

4、本试剂盒宜置 4°C冰箱保存。

 

5、本试剂盒仅用于科研，不能用于临床诊断！