人卵巢癌细胞的培养步骤与应用！

一、背景

人卵巢癌细胞是人卵巢癌悬浮细胞系，该细胞建系于1993年。细胞于原代培养至第17天首次传代，以后反复传代，生物学特性稳定。可表达多种肿瘤标志物和野生型P53蛋白、突变型P53蛋白。裸鼠接种产生分化差的腺癌。

卵巢癌是卵巢肿瘤的一种恶性肿瘤，是指生长在卵巢上的恶性肿瘤，其中90%～95%为卵巢原发性的癌，另外5%～10%为其它部位原发的癌转移到卵巢。由于卵巢癌早期缺少症状，即使有症状也不特异，筛查的作用又有限，因此早期诊断比较困难，就诊时60%～70%已为晚期，而晚期病例又疗效不佳。

二、培养步骤

1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37水浴中迅速摇晃解冻，加入5mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心5分钟，弃去上清液，补加4-6mL完全培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入6cm皿中），培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。

2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。收集细胞，1000RPM条件下离心8-10分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。

三、应用

用于双氯芬酸对卵巢癌铂类耐药细胞COC1/DDP化疗敏感性的影响研究：

用MTT检测药物对卵巢癌铂类耐药细胞COC1/DDP的增殖抑制作用；应用流式细胞技术检测药物作用后卵巢癌铂类耐药细胞COC1/DDP的凋亡率；应用免疫细胞化学法检测卵巢癌细胞COC1和卵巢癌铂类耐药细胞COC1/DDP细胞中E2F1的表达情况。

方法：应用MTT和流式细胞技术检测双氯芬酸单药、顺铂单药及顺铂联合双氯芬酸作用后卵巢癌铂类耐药细胞COC1/DDP的生长抑制率及其对顺铂的半数抑菌浓度（IC50）和细胞凋亡率；应用免疫细胞化学法检测卵巢癌细胞COC1及卵巢癌铂类耐药细胞COC1/DDP中E2F1表达情况，检测不同浓度的双氯芬酸作用48h后及浓度为50mol/L的双氯芬酸作用72h后卵巢癌铂类耐药细胞COC1/DDP中E2F1表达情况。

统计学方法：采用SPSS17.0统计和分析实验数据。以a=0.05作为检验水准。

结果：1、双氯芬酸单药作用48h后卵巢癌铂类耐药细胞COC1/DDP的生长抑制率差异有统计学意义，进一步两两比较，药物浓度10mol/L、30mol/L、50mol/L三组两两比较差异均无统计学意义（P>0.05），药物浓度70mol/L、90mol/L与以上三组两两比较差异有统计学意义（P<0.05）。

2、顺铂单药作用48h后卵巢癌铂类耐药细胞COC1/DDP对顺铂的IC50=8.39g/ml，顺铂联合双氯芬酸作用48h后卵巢癌铂类耐药细胞COC1/DDP对顺铂的IC50=4.35g/ml，两者抑制率比较差异有统计学意义（P<0.05）。

3、浓度为50mol/L的双氯芬酸单药作用48h后卵巢癌铂类耐药细胞COC1/DDP细胞凋亡率=（2.850.37）%，浓度为4g/ml的顺铂单药作用48h后卵巢癌铂类耐药细胞COC1/DDP细胞凋亡率=（12.740.45）%，顺铂联合双氯芬酸作用48h后卵巢癌铂类耐药细胞COC1/DDP细胞凋亡率=（23.780.49）%，凋亡率比较差异有统计学意义（P<0.05）。