BL21(DE3)感受态细胞的操作步骤与注意事项！

一、细胞简介

平台编号：bio-105922

规格：20×0.05ml

拉丁属名：BL21(DE3)感受态细胞

细胞名称：BL21(DE3)感受态细胞

注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用

二、产品说明

BL21（DE3）感受态细胞是采用大肠杆菌BL21（DE3）菌株经特殊工艺处理得到的感受细胞，可用于DNA的化学转化。使用pUC19质粒检测，转化效率可达107，-70保存几月转化效率不发生改变。

BL21(DE3)菌株适合表达非毒性蛋白。该菌株是以T7 RNA 聚合酶为表达系统的外源基因蛋白高效表达的宿主。T7 噬菌体RNA 聚合酶基因的表达受λ噬菌体DE3区的lacUV5 启动子调控，该区整合在BL21 染色体上。本产品是大肠杆菌BL21(DE3)菌株经特殊工艺处理得到的感受态细胞，可用于DNA的热击转化。使用pU19持粒检测，转化效率可达107。

基因型：fhuA2 [lon] ompT gal (λ DE3) [dcm] ?hsdS λ DE3 = λ sBamHIo ?EcoRI-B int::(lacI::PlacUV5::T7 gene1) i21 ?nin5

三、产品特点

1、转化效率可达107。

2、可用于非毒性蛋白表达。

3、长时间保存于-80 ，转化效率不发生改变

四、操作步骤

1、取感受态细胞置于冰浴中，放置10分钟。

2、向感受态细胞中加入1-5μl含有1pg-100ng的质粒DNA，轻轻地敲打4-5下。

3、冰浴30分钟，不要震荡。

4、42热击45秒，不要震荡，迅速转移到冰浴中，放置2分钟。

5、加入250μl室温的SOC培养基。

6、混匀后，置于37的摇床上，250rpm震荡培养60min。

7、将含有抗生素的平板加热到37，放置半个小时，使其表面干燥，易于均匀涂布。

8、根据实验要求，取适量转化的感受态的细胞，加到含有抗生素的固体琼脂糖培养基上（LB或SOC），用无菌棒将细胞均匀涂开，将平板置于37培养箱，倒置过夜培养（8-12h）。

五、运输和储藏

干冰运输，收到后请置于-80。

六、注意事项

1、感受态细胞应保存在-70，不可反复冻融，否则其转化效率将会降低。

2、实验过程中应严格无菌操作，防止其它DNA或杂菌的污染，避免为以后的筛选、鉴定带来影响。

3、转化时，转化效率与外源DNA的浓度在一定范围内成正比，但当加入的外源DNA量过多或体积过大反而会降低转化效率。转化时DNA体积要小于感受态细胞体积的十分之一。

4、转化率的计算：转化率＝产生菌落的总数/铺板DNA总量。

5、为防止转化实验不成功，可以保留部分连接产物，以重新转化，将损失降到最低。