皮氏罗尔斯顿氏菌的注意事项与培养方法！

一、菌种简介

平台编号：bio-74037

规格：冻干物

拉丁属名：Ralstonia pickettii

菌种名称：皮氏罗尔斯顿氏菌

拉丁文名：Ralstonia pickettii

其他编号：JCM 5969。=ATCC 27511=CECT 330 =CGMCC 1.1807=DSM 6297

培养基编号：194

培养温度：30

培养时间：24-48 小时

用途：研究

分离源：做过气管切开手术的病人

相关的培养基详细信息如下：

培养基编号：194

名称：Nutrient broth with 0.5% NaCl

备注：Bacto peptone 5.0g Beef extract 3.0g NaCl 5.0g Distilled water 1.0L Adjust pH to 7.0

注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用

二、培养基

·NB+5%NaCl

NB 配方如下：

细菌蛋白胨 5 克

牛肉膏 3 克

NaCl 5 克

蒸馏水 1 升

如有需要加琼脂 20 克可做成固体培养基

PH—7.0

三、保藏条件

斜面菌种和冻干菌种应在 2-8°C 保存。西林瓶请置于-20保存。

四、注意事项

1）冻干首次活化，干粉要全部用完，不能预留，参照“开管说明”，用无菌吸管吸取0.3ml-0.5ml 的培养液（即以上建议的培养基配方，不加琼脂）或者无菌水，滴入冻干管中，轻轻振荡至其溶解。吸取全部菌悬液，接种在培养基上（建议不超过 2 支斜面或平板）；

2）经过冷冻干燥保藏，菌种处于休眠状态，复苏培养时可能会延迟生长，这时需较长的培养时间； 若您收到的是已复苏的培养物（非冻干菌），则可以直接用于您的实验，或根据需要转接培养如有不明白之处，请务必先咨询我单位技术人员，避免不必要的损失；

3）微生物菌种应保藏于低温、清洁干燥的地方，室温放置时间过长会导致菌种衰退；

4）菌种操作应在无菌条件下进行；转种完毕，应经灭菌再做丢弃处理；

5）应根据菌种状况及时转接，冻干菌种保藏时间通常为 2-25 年；

6）菌种使用过程中如出现杂菌污染或菌种生产性能下降，应及时和微生物菌种查询网联系。

7）如若有菌种复苏不活或者污染等情况，请在收到菌钟后 2 个月内联系，逾期不予受理；

8）打管操作需由专业微生物技术人员在相应的防护设备中进行，生物危害程度为三类的菌种应在生物安全柜中操作，打管时冻干管应远离面部，保护眼睛。

9）安瓿瓶开封：用浸过 75％酒精的脱脂棉擦净安瓿管，用火焰加热其顶端，滴少量（2-3滴）无菌水至加热顶端使之破裂，用锉刀或者镊子敲下已破裂的安瓿管顶端并将冻干管开口处在火焰上过一遍，并保持在火焰旁操作。

所购菌种如果为冷冻干燥安瓿，建议采用下列方法恢复培养，供参考。

（一）安瓿管开启

1、用浸过75％酒精的脱脂棉球檫净安瓿管表面。

2、用酒精灯火焰将安瓿管顶端加热。

3、将冷的无菌水滴至加热的安瓿管顶端使玻璃裂开。

4、用无菌的镊子敲开安瓿管顶端。

（二）菌种恢复培养

1、用无菌吸管加0.3ml无菌水于安瓿管内，使冻干菌种块溶化呈悬浮状。

2、用无菌吸管取0.1ml悬浮液于己制备好的适宜该菌生长的斜面培养基上，涂匀，在适宜的温度下培养。

（三）注意事项

1、全部操作过程需在无菌条件下进行。

2、每支安瓿的菌悬液最多只能接3-4支斜面，避免接种量太少不利于菌种生长。有些菌种经冷冻干燥后，需连续两次继代培养才能正常生长。

3、要求在厌氧条件下培养的菌种，自开封后的全过程，均需按厌氧菌培养条件的要求处理。

4、此安瓿管一次性使用完。