色谱流出曲线和术语！百欧博伟生物

 

一、色谱流出曲线

 

在色谱法中，当样品加入后，样品中各组分随着流动相的不断向前移动而在两相间反复进行溶解、挥发，或 吸附、解吸的过程。如果各组分在固定相中的分配系数（表示溶解或吸附的能力）不同，就有可能达到分离。

 

分配系数小的组分滞留在固定相中的时间短，在柱内移动的速度快，先流出柱子；分配系数大的组分滞留在固定相中的时间长，在柱内移动的速度慢，后流出柱子；分离后的各组分经检测器转换成电信号而记录下来，得到一条信号随时间变化的曲线，称为色谱流出曲线或 “色谱峰”，理想的色谱流出曲线应该是正态分布曲线：

 

二、术语

 

1、基线：操作条件稳定后，没有试样通过时检测器所反映的信号-时间曲线称为基线（O - O’）

 

（它反映检测系统噪声随时间变化的情况，稳定的基线应是一条水平直线）

 

2、死时间 t0（dead time）：

 

指不被固定相吸附或溶解的组分（如空气、甲烷等）从进样开始到色谱峰顶所对应的时间，如图t0所示。

 

3、死体积 V0（dead volume ）：

 

由进样器至检测器的流路中，未被固定相占有的空隙   体积称为死体积

 

（导管空间、色谱柱中固定相间隙、检测器内腔空间总和）

 

当色谱柱载气流速为F0(ml／min)时，它与死时间的关系为：

 

V0  = t0·F0                             (1)

 

4、保留值：定性参数，是在色谱分离过程中，试样中各组分在色谱柱内滞留行为的一个指标。

 

（1）保留时间 tR （retention time）：

 

从进样到柱后出现待测组分浓度最大值时（色谱峰顶点）所需要的时间，称为该组分的保留时间。如图中tR(1)、 tR(2) 所示，（是待测组分流经色谱柱时，在两相中滞留的时间和）

 

保留时间与固定相和流动相的性质、固定相的量、柱温、流速和柱体积有关，可用时间单位（min）表示。

 

（2）调整保留时间 tR’（adjusted retention time）：

 

扣除死时间后的组分保留时间，如图中的tR(1)’、 tR(2)’所示。tR’ 表示某组分因溶解或吸附于固定相后，比非滞留组分在柱中多停留的时间：

 

tR’= tR – t0                                      (2)

 

（3）保留体积 VR （retention volume）：

 

从进样到柱后出现待测组分浓度最大值时所通过的载气体积。

 

当色谱柱载气流速为F0(ml/min)时，它与保留时间的关系为：

 

VR = tR F0                                      (3)

 

（4）调整保留体积 VR’（adjusted retention volume）：是指扣除死体积后的保留体积，即：                

VR’=  VR – V0=  tR’·F0                     (4)

 

在一定的实验条件下VR、VR’与载气流速无关（tR·F0 及 tR’·F0为一常数）

 

（5）相对保留值 r21（relative retention value）：指组分 2 和组分 1 的调整保留值之比。

 

相对保留值的特点是只与温度和固定相的性质有关，与色谱柱及其它色谱操作条件无关。反映了色谱柱对待测两组分1和 2 的选择性，是气相色谱法中最常使用的定性参数。

 

5、峰高（h）：色谱峰顶与基线之间的垂直距离

 

6、色谱的区域宽度（peak width）通常用三种方法来表示：

 

（1）标准偏差s （standar deviation）：

 

为正态分布曲线上拐点间距离之半。对于正常峰，s为0.607倍峰高处色谱峰宽度的一半。

 

（s 的大小表示组分被带出色谱柱的分散程度，s 越大，组分流出越分散；反之亦反。s 的大小与柱效有关，s 小，柱效高）

 

（2）半(高)峰宽 Wh/2（peak width at half-height）：

 

峰高一半处的色谱峰宽度。半峰宽与标准偏差的关系为：

           

（3）峰宽或称Wb：通过色谱峰两侧的拐点作切线，切线与基线交点间的距离为峰宽，即图中GH。

 

峰宽与标准偏差的关系为：  Wb = 4s = 1.699 Wh/2

 

北京百欧博伟生物技术有限公司（biobw）是北京的一家专业于生物技术的研究与广泛运用及推广的高科技公司，位于北京企业林立的丰台区造甲街，生物技术推广及运用早于2011年开始，成立公司于2013年一月。本公司主要提供色谱耗材、色谱仪器、固相萃取装置、化学试剂、样品瓶、氘灯、标准品、微生物技术、菌种保藏服务以及ATCC产品代理等产品及服务。国家标准物质资源平台