3T3-E1/鼠胚成骨细胞3T3-E1的应用！

一、概述

3T3-E1/鼠胚成骨细胞3T3-E1又叫MC3T3-E1细胞，用途：只可用于科研。

二、细胞生长条件

培养基    90%  RPMI-1640

血清      10%  FBS (Diagnovum )

温度      37

空气条件  5% CO2，95% AIR

冻存条件  培养基50%、血清40%、DMSO 10%

三、应用

3T3-E1/鼠胚成骨细胞3T3-E1可用于氧化应激测试。

CN201510396863.X提供一种成骨细胞氧化应激测试方法，特别是针对成骨细胞MC3T3E1细胞的氧化应激测试方法，该方法将成骨细胞MC3T3-E1细胞为对象，有效测试出氧化应激刺激能引起细胞的死亡，并损害成骨细胞的正常功能，抑制成骨细胞的分化，有助于阐明氧化应激在骨质疏松症发病机制中的作用，为抗骨质疏松症新药的研制提供一定的理论依据。衰老是生物随着时间的推移，发生的一个不可逆的过程。它是复杂的自然现象，表现为结构和机能衰退，适应性和抵抗力减退，更易感染疾病。随着年龄的增加，自由基的产生增加。在衰老及其并发症中，体内增加的活性氧(Reactive oxygen species,ROS)扮演着重要的角色。骨质疏松症是老年性疾病，患病率与年龄成正比。以往，雌激素缺乏被认为是骨质疏松症发生的主要机制。然而骨质的流失开始于三十岁，而且补充雌激素并不能有效治疗老龄性骨质疏松。衰老引起的骨质丢失是不依赖性激素的，氧化应激起了非常大的作用。氧化应激可直接或间接地影响骨吸收与骨形成的过程。为了模仿衰老中ROS对骨代谢的影响，本发明对前成骨细胞MC3T3-E1进行H2O2刺激诱导氧化应激反应。

本发明的目的可以通过以下技术方案来实现：

一种MC3T3-E1成骨细胞氧化应激测试方法，其步骤包括，

(1)将α-MEM培养液37-40预热20-25分钟；然后将α-MEM培养液重悬MC3T3-E1细胞，均匀，接种于培养皿中，摇匀，放入37、5％CO2培养箱中进行培养；

(2)每2-3天换一次液，3-5天后细胞达到80-90％汇合时弃去原培养液，胎牛血清洗净后，加入1ml浓度为0.25％Trypsin-EDTA放入37、5％CO2培养箱中1-2分钟，加入2ml培液终止消化，制成MC3T3-E1细胞悬液；

(3)取生长状态良好的MC3T3-E1细胞悬液接种于六孔板中，α-MEM培 养液预培养24小时使细胞贴壁；

(4)取步骤(3)中的浓度为0.1-1.0mmol/L的成骨细胞液，培养20-28小时后加入浓度为0.1-1.0mmol/L的过氧化氢溶液；

(5)去除原有α-MEM培养液，用正常α-MEM培养液清洗2-4次后再用PBS清洗1-3次，每孔加入10ul的CCK-8毒性/增殖检测试剂，37避光孵育3小时；

(6)在450nm波长处，测定各孔光吸收值即可。

所述α-MEM培养液中含有质量浓度为10％的胎牛血清和质量浓度为1％的抗生素。

所述抗生素为青链霉素。

所述步骤(1)中的培养皿的厚度为10cm。

所述步骤(1)均匀的方式为十字结合八字法。

所述步骤(3)中的MC3T3-E1细胞悬液接种密度为6x104/cm2。

与现有技术相比，本发明的有益效果在于：

1、本发明采用成骨细胞MC3T3-E1细胞为对象，有效测试出氧化应激刺激能引起细胞的死亡，并损害成骨细胞的正常功能，抑制成骨细胞的分化，有助于阐明氧化应激在骨质疏松症发病机制中的作用，为抗骨质疏松症新药的研制提供一定的理论依据。

2、本测试方法简单、有效，便于实施。

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