微生物基本知识：溶血试验！

一、血平板溶血试验

1、培养基：营养琼脂，含有0.85%的氯化钠和5%（体积分数）的去纤维蛋白血或经草酸盐处理过的血。马血对链球菌很合适，但其他的微生物(例如葡萄球菌)则用其他的动物血〈例如羊、兔子、牛)要更好一些。营养琼脂培养基熔化后，冷却到50，无菌地加入已灭菌的血细胞溶液(每10ml琼脂加0.5ml)。用手旋转或翻转试管使其混合，倒入培养皿中。另外，也可以在培养皿中先加入〔5—10ml〕营养琼脂，凝固后在营养琼脂上再倒人5ml血琼脂，形成薄层,凝固。

2、试验方法：对于葡萄球菌，在平板上划线接种，以得到单个菌落；如果是链球菌，可以倾倒平板接种，也可以划线接种。在最佳生长温度培养2d。

3、结果记录：如菌落周围有清晰的环带出现，则表明有溶血现象。链球菌的β-溶血素作用能产生边缘清晰的环带；α-溶血素作用产生的环带呈灰绿色且边缘很模糊。但要注意，α-溶血素和β-溶血素的特征对于链球菌和葡萄球菌完全不同。对于葡萄球菌，则α-溶血素能产生清晰的环带，而β-溶血素则产生暗色的模糊环带。但是，葡萄球菌中的α-溶血素有时却被认为是β-溶血素。因此，为避免混淆，最好是对溶血素的类型加以描述，而不仅是统称为溶血素。

二、加强溶血试验（CAMP）

加强溶血试验是用于检测B族链球菌中的一些菌株和某些特定菌株产生的细胞外可扩散的多肽（CAMP因子）。多肽与葡萄球菌中的β-溶血素可协同作用,使羊血琼脂中两种菌划线培养的结合处产生加强的溶血作用。甚至非溶血的B族链球菌的CAMP测试也呈阳性。后来该方法被用来区分李斯特菌的不同菌种。

1、培养基：羊血(体积分数为5%)琼脂。在检测李斯特菌属时，由于羊血中常携带有李斯特菌属的抗血清，必须先用盐水冲冼羊血的红血球，然后再重新悬浮于灭菌的盐水中。

2、试验方法

（1）链球菌检测将产生β-溶血的金黄色葡萄球菌培养液横穿羊血琼脂培养基平板划一条直线。在直线的一端用待测培养液垂直划线,该线与金黄色葡萄球菌培养液的划线相距1-2mm，37培养18-24h。

（2）李斯特菌的检测 将产生β-溶血素的金黄色葡萄球菌培养液横穿冲洗过的羊血琼脂培养基平板划一条直线。用马红球菌培养液划另一条平行线，两线相距4cm左右：用待测菌液垂直于金黄色葡萄球菌和马红球菌划线,与金黄色葡萄球菌球菌培养液和马红球菌培养液的线县局1-2mm，18-24h。

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