高效液相色谱仪的操作步骤和注意事项！

一、高效液相色谱仪操作步骤：

过滤流动相，根据需要选择不同的滤膜。

对抽滤后的流动相进行超声脱气10-20分钟。

打开HPLC工作站(包括计算机软件和色谱仪)，连接好流动相管道，连接检测系统。

进入HPLC控制界面主菜单，点击manual，进入手动菜单。

有一段时间没用，或者换了新的流动相，需要先冲洗泵和进样阀。冲洗泵，直接在泵的出水口，用针头抽取。冲洗进样阀，需要在manual菜单下，先点击purge，再点击start，冲洗时速度不要超过10 ml/min。

调节流量，初次使用新的流动相，可以先试一下压力，流速越大，压力越大，一般不要超过2000。点击injure，选用合适的流速，点击on，走基线，观察基线的情况。

设计走样方法。点击file，选取select users and methods，可以选取现有的各种走样方法。若需建立一个新的方法，点击new method。选取需要的配件，包括进样阀，泵，检测器等，根据需要而不同。选完后，点击protocol。一个完整的走样方法需要包括：a.进样前的稳流，一般2-5分钟;b.基线归零;c.进样阀的loading-inject转换;d.走样时间，随不同的样品而不同。

进样和进样后操作。选定走样方法，点击start。进样，所有的样品均需过滤。方法走完后，点击postrun，可记录数据和做标记等。全部样品走完后，再用上面的方法走一段基线，洗掉剩余物。

关机时，先关计算机，再关液相色谱。

填写登记本，由负责人签字。

二、操作注意事项：

柱子是非常脆弱的，第一次做的方法，先不要让液体过柱子。

所有过柱子的液体均需严格的过滤

流动相均需色谱纯度，水用20M的去离子水。脱气后的流动相要小心振动尽量不引起气泡。

压力不能太大，最好不要超过2000 psi。

因为每个品牌的仪器和操作界面都不一样，根据其原理和操作的要求，以上步骤仅为企业的一般仪器操作步骤，企业可根据自身的仪器操作说明书进行。

北京百欧博伟生物技术有限公司（biobw）是北京的一家专业于生物技术的研究与广泛运用及推广的高科技公司，位于北京企业林立的丰台区造甲街，生物技术推广及运用早于2011年开始，成立公司于2013年一月。本公司主要提供色谱耗材、色谱仪器、固相萃取装置、化学试剂、样品瓶、氘灯、标准品、微生物技术、菌种保藏服务以及ATCC产品代理等产品及服务。