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circRNA　Luciferase报告基因系统检测(环状RNA)

(2019-01-07 14:28:40)
标签：

circrna

luciferase

报告基因系统

环状rna

广州莱德盟生物

 分类： circRNA功能研究
     广州莱德盟生物科技有限公司在生命科学领域专注于生物医学实验外包服务已长达10+年，协助客户各类实验及论文润色无数，是客户您最值得信赖的科研合作伙伴！

简介
    Luciferase报告基因系统是以荧光素(luciferin)为底物来检测萤火虫荧光素酶(fireflyluciferase)活性的一种报告系统。荧光素酶可以催化luciferin氧化成oxyluciferin，在luciferin氧化的过程中，会发出生物荧光(bioluminescence)。然后可以通过荧光测定仪也称化学发光仪(luminometer)或液闪测定仪测定luciferin氧化过程中释放的生物荧光。荧光素和荧光素酶这一生物发光体系，可以极其灵敏、高效地检测基因的表达。 应用原理 本实验适用于验证circRNA sponge功能，荧光素酶报告基因实验（luciferaseAssay）是检测某个circRNA和靶标miRNA特异性结合的重要手段。

原理：
    （1）构建一个将circRNA特定片段插入到荧光素酶报告基因质粒，如psiCHECK等。
    （2）将要检测的miRNA与报告基因质粒共转染293细胞或其它相关的细胞系。如果此miRNA能够与circRNA结合，则荧光素酶基因就会下调，荧光素酶的表达量与miRNA-circRNA的作用强度成反比。
    （3） 加入特定的荧光素酶底物，荧光素酶与底物反应，产生荧光素，通过检测荧光的强度可以测定荧光素酶的活性，从而判断miRNA-circRNA的相互作用。

服务介绍：
    当miRNAs被 circRNA吸附，理论上细胞内miRNA的总量不会产生变化，因此无法通过qRT-PCR检测来判断miRNA是否吸附。通常只能通过预测可能被吸附的miRNA，过表达circRNA后通过检测miRNA的下游基因表达差异，间接反映circRNA sponge功能。但这种方法，不能有效说明是circRNA -miRNA直接作用的结果。直接的证据在于Sensor reporter的构建与活性检测，我公司的技术人员利用psiCHECK质粒，对miRNAs与circRNA的关系作出准确判断。

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