在进行文库构建，Southern杂交以及荧光定量pcr等科研实验时，往往有个前提，就是提取高质量的基因组DNA，关于基因组DNA的方法，前面介绍了很多，本文介绍基因组DNA提取的常见注意事项。

1.样品的收集和保存

    尽量使用新鲜的组织材料，采集样品如果不马上用于提取实验，请置于-20或者-70以下存放，期间应避免反复冻融。使用反复冻融或长时间未低温冷藏的样品进行DNA提取时，所提取的DNA片段可能不完整，或收获量低。对于较难破碎细胞壁的细菌和酵母细胞，应尽量收集处于生长对数期的菌体，以取得最佳实验效果。

2.样品处理方式

    样品材料进行破碎(及匀浆)可以提高裂解效率，组织破碎后可以充分与裂解液接触，利于裂解。不同来源的组织材料，根据组织成分的差异，样品处理的方式也有所不同。一般来说，样品的破碎方式，主要有液氮研磨、匀浆和蛋白酶K消化。

(1)细菌及酵母
细菌需要加入溶菌酶(Lysozyme), 破碎细胞;酵母细胞需要加入溶壁酶(Lyticase) 破碎细胞壁。

(2)动物组织
一般需要加入蛋白酶K消化组织，无需液氮研磨、匀浆，尽量剪碎即可(如老鼠尾巴，加入蛋白酶K消化1~4h即可)。充分破碎可以减少裂解时间，可使用玻璃匀浆器。

(3)植物组织
必须液氮研磨破碎。

3.DNA的洗脱

    在低盐的条件下，DNA可以很容易地从硅胶膜上洗脱下来，洗脱液采用低盐缓冲液(10mmol/I, Tris. HCI，pH8.5)。 洗脱液pH值在7.0~8.5之间时，洗脱效率最大，如果用ddH2O进行洗脱，请保证pH值在此范围内。将洗脱缓冲液65预热，进行洗脱，将会提高洗脱效率。

4.DNA检测

     纯化到的基因组DNA的OD260/OD280一般会在1.7~1.9之间，电泳检测时，电泳条带跟上样量以及琼脂糖凝胶的浓度有很大关系，纯化到的基因组DNA理想状态下为单一条带，但是往往由于提取过程中操作等原因，电泳显示不清晰的成片条带，属于正常现象。

(1) DNA溶液稀释20~30倍后，测定OD260/OD280比值，明确DNA的含量和质量。
(2)取2~5μL在0.7% Agarose胶上电泳，检测DNA的分子大小。
(3)取2μg DNA,用10单位(U) Hind酶切过夜，0.7%Agarose胶上电泳检测能否完全酶解(做RFLP, DNA必须完全酶解)。

5.DNA保存和稳定性

    DNA分子在碱性条件下可以稳定存在，试剂盒所用洗脱液为pH8.5的缓冲液，可以稳定保存DNA分子。实验室所用ddH2O的pH值往往小于7.0，长时间保存，DNA容易发生降解。长期保存时，应置于-20或-80，并且避免反复冻融。

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