FISH样本的制备简单介绍

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胰酶细胞细胞悬液 |
1.1000转/分离心羊水(AF)5分钟。羊水应没有血色或褐色。
2.用2-5ml的1×胰酶/EDTA溶液(0.05%胰酶,0.53MEDTA4Na的Hank氏平衡盐溶液,不含CaCl2、MgCl2.6H2O、MgSO4.7H2O)悬浮沉淀,37水浴15分钟以上。
3.1000转/分离心5分钟。
4.用2-5ml的0.56%KCl溶液悬浮细胞,37水浴20分钟。这些处理步骤的目的是使羊水细胞成为悬浮的单细胞。
5.加0.8-2ml的固定液(31甲醇冰醋酸)至细胞低渗液中,轻轻混匀。
6.1000转/分离心悬液5分钟,用1ml新的固定液重新悬浮细胞。4保存固定的样本30分钟以上,直至FISH检测前。若要长期保存,-20保存在固定液中。
7.制片前根据悬浮细胞数调整悬液的体积。若储存时间超过一个月以上,在制片前用固定液清洗细胞。
8.直接滴加细胞悬液至1-2片预冷的玻片上,每片2个杂交区(每个区域15-25霯细胞悬液)。
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