6孔板转染细胞实验步骤

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1.转染前一天接种细胞于6孔板,5×104每孔,第二天转染时细胞汇合度达到60%-70%每孔。
2.转染前半小时将完全培养基换无血清培养基1.9
ml。
3.A液:RNA
100 pmol/DNA 2μg (根据核酸类型不同,用量不同)加入50 ul
Opti-MEM无血清培养基,轻轻混匀,室温静置5min。
4.B液:脂质体使用前轻轻混匀,脂质体5ul
加入50 ul Opti-MEM无血清培养基,轻轻混匀,室温静置5min。
5.B液加入到A液中,用枪轻轻混匀,室温静止20min。
6.将混合液均匀分散慢慢滴加到6孔板细胞中,边滴加边前后左右十字交叉轻轻摇晃。
7.孵箱37培养4~6h,然后将无血清培养基换成完全培养基继续培养。
8.mRNA
水平的检测:在转染后24-48h后,用Real-time
PCR的方法在mRNA水平进行检测。
9.蛋白水平的检测:在转染后48-72h后,用Western-blot或免疫组化的方法在蛋白水平进行检测。
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