碱性磷酸酶提取分离纯化

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碱性磷酸酶、广泛存在于微生物界和动物界,碱性磷酸酶几乎能催化所有磷酸单酯的水解反应,产生无机磷酸和相应的醇、酚或糖。他也可以催化磷酸基团的转移反应。磷酸基团从磷酸酯转移到醇、酚或糖等磷酸受体上。
分离纯化:
1、取1g新鲜的兔肝至于70冰箱内进行预先冷冻处理后取出,至于玻璃匀浆器内。加入0.01mo1/L醋酸镁、0.01mo1/L醋酸钠混合溶液3mL,充分研磨至糊状。
2、将匀浆液倒入刻度离心管中,使用4ml、0.01mo1/L醋酸镁、0.01mo1/L醋酸钠混合溶液冲洗研磨器具,将冲洗液一并转入离心管内,离心管一定要置于冰块保护下,以后各个步骤也要注意保持低温。
3、加1mL正丁醇与匀浆原液中,使用玻璃棒充分搅匀,放置冰浴中2min。使用滤纸过滤,过滤置于另一支刻度离心管中,过滤液也需要冰块保护。
4、滤液中加入等体积的冷丙酮,立即混匀后离心、2000r/min5min,弃去上清液,在沉淀中加入0.5mol/L醋酸镁2mL用玻璃棒充分搅拌使其溶解。
5、向沉淀中加入4.0mL0.5mol/L醋酸镁溶液,充分搅拌使其溶解。同时记录悬液体积向上清液中加入95%冷乙醇,使乙醇浓度到达60%,混匀后立刻离心5min(2500r/min),弃上清液。
向沉淀中加入4.0ml 0.01mol/L醋酸镁一0.01mol/L酸钠溶液,充分搅拌,使其溶解。向上余悬液中逐滴加入冷丙酮,使丙酮浓度33%,混匀后离心5min(2000r/min),弃去沉淀物。