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考马斯亮蓝染色原理

(2018-12-26 13:01:33)
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考马斯亮蓝染色

吉至试剂

生化试剂

在蛋白质染色方法中,目前以考马斯亮蓝染色最为常用。因为它既克服了氨基黑染色灵敏度不高的限制,又比银染简便易操作,并且染色时间短,一般半小时内即可检测到蛋白电泳条带。

考马斯亮蓝染料的灵敏度:  

    考马斯亮蓝染色可以达到0.2-0.5 μg(200-500 ng),最低可检出100ng蛋白;银染的灵敏度比考染高将近100倍,最低可以检出2 ng蛋白。  通过考马斯亮蓝染色条带的深浅粗细,可以大致判断该条带有多少蛋白。

考马斯亮蓝染料的原理: 

    考马斯亮蓝G-250和R-250两种。其中R为红蓝色,G为绿蓝色。R-250即三苯基甲烷,每个分子含有两个SO3H基团,偏酸性,与氨基黑一样也是结合到蛋白质的碱性基团上。G-250即二甲花青亮蓝,是一种甲基取代的三苯基甲烷。G-250在游离状态下呈红色,最大吸收峰在465nm。当它与蛋白质结合后变成深蓝色,最大吸收峰变为595nm。蛋白质含量在1-1000μg范围内,蛋白质-染料复合物在595nm处的吸光度与蛋白质含量成正比,故可用比色法测定。 

http://s5/mw690/007cZuf0zy7qgFMkAMk84&690

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