AF488 NHS ester是一种胺特异性荧光探针(Em=525 nm)。AF488 NHS ester在水和生物样品中，与巯基和胺反应，并在衍生化后改变它们的化学结构和荧光性质。

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　　AF488 NHS ester的生物活性

　　体外研究

　　AF488 NHS ester的IgG荧光标记与抗IgG固相肽库筛选

　　(1)将冻干的IgG以5 g/L的浓度溶解在50 mM磷酸钠、20 mM氯化钠、PH 8.3的溶液中。

　　(2)1 mg AF488 NHS ester溶于100?L extra dry DMF中，加入1 mL(1)中溶液，室温旋转孵育1 h。

　　(3)用Amicon Ultra 0.5-mL离心式过滤装置，配有3-kDa MWCO过滤器收集样品。

　　(4)六聚体或四聚体去保护文库在50 mM磷酸钠、150 mM氯化钠、PH 7.4(PBS)溶液中以5×沉淀树脂体积洗涤三次以平衡。

　　(5)用50 mM磷酸钠、150 mM氯化钠、0.2%吐温(PH 7.4)溶液稀释IgG-AF488至终浓度为1.3 mg/mL。

　　(6)将(4)和(5)在2-8°C下孵育过夜。

　　(7)用50 mM磷酸钠、150 mM氯化钠、0.1%吐温20、PH 7.4(PBS-T)洗涤树脂珠。

　　(8)将树脂在40?L PBS-T的96孔板中每孔沉积1个珠，然后使用荧光显微镜以10倍放大率成像。在480 nm激发下，以510 nm发射强度为阈值进行Alexa Fluor 488荧光测量和荧光筛选。

　　AF488 NHS ester储存液

　　用DMF配制20 mM的AF488 NHS ester。

　　注：AF488 NHS ester储存液建议分装后于-20°C避光保存。

　　MCE尚未独立证实这些方法的准确性。仅供参考。