MCE产品 JC-1线粒体膜电位检测试剂盒资料

 

　　规格：1T, 1 mL （100 万细胞）

 

　　用途：早期细胞凋亡

 

　　检测设备：荧光显微镜、激光共聚焦显微镜、荧光分光光度计或流式细胞仪

 

　　通道：FITC 通道看绿色，PI 通道看红色

 

　　指示：红绿荧光比例变化

 

 

　　a.将 PBS （10×） 温浴，直至完全融化。

 

　　b.按 1:10 的比例，用 dH2O 稀释 PBS （10×） 至 PBS （1×）。

 

 

　　1） 悬浮细胞：

 

　　a.以 6 孔板为例，每孔用 1 mL 培养基重悬 100 万细胞，其他培养器皿以此类推。

 

　　b.阳性对照的设置：取适量 CCCP （50 mM） 恢复至室温，阳性对照孔培养基中加入 1 μL，其终浓度为 50 μM，细胞培养箱 37孵育 5 分钟。

 

　　c.取适量 JC-1 （200 μM） 恢复至室温，每孔培养基中加入 10 μL JC-1 （200 μM），其终浓度为 2 μM，细胞培养箱 37孵育 15-20 分钟。

 

　　d.37 孵育结束后，400 g 4离心 3-4 分钟，沉淀细胞。弃上清，注意尽量不要吸除细胞。

 

　　e.用 PBS （1×） 洗涤 2 次：加入 2 mL PBS （1×） 重悬细胞，400g 4离心 3-4 分钟，沉淀细胞，弃上清。重复洗 1 次。

 

　　f.再用 500 μL 的 PBS （1×） 重悬细胞，用荧光显微镜或激光共聚焦显微镜观察，也可以用荧光分光光度计或流式细胞仪分析 （绿色荧光：Ex/Em=510/527 nm；红色荧光：Ex/Em=585/590 nm）。

 

　　注：若用荧光分光光度计或流式细胞仪检测贴壁细胞，可先对贴壁细胞进行消化、收集，重悬后参考悬浮细胞的检测方法。若用荧光显微镜或共聚焦显微镜检测，方法如下：

 

　　a.以 6 孔板为例，每孔加入 1mL 细胞培养液。

 

　　b.阳性对照的设置：取适量 CCCP （50 mM） 恢复至室温，阳性对照孔培养基中加入 1 μL，其终浓度为 50 μM，轻摇混匀，细胞培养箱 37孵育 5 分钟。

 

　　c.取适量 JC-1 （200 μM） 恢复至室温，每孔培养基中加入 10 μL JC-1 （200 μM），其终浓度为 2 μM，轻摇混匀，细胞培养箱 37孵育 15-20 分钟。

 

　　d.37?C孵育结束后，吸除上清，用 PBS （1×） 洗涤2次。

 

　　e.加入 500 μL 的 PBS （1×），用荧光显微镜或激光共聚焦显微镜观察 （绿色荧光：Ex/Em=510/527 nm，可用 FITC 通道；红色荧光：Ex/Em=585/590 nm，可用PE/PI通道）。