一、电泳类试剂

1.50×Tris-乙酸（TAE，pH=8.5）缓冲液

成分及终浓度	配制100mL溶液各成分的用量
2mol/L Tris碱  1mol/L 乙酸  100 mmol/L EDTA  水	24．2g  5.71 mL的冰乙酸（17.4 mol/L）  3.72gNa2EDTA·2H2O  补足100mL

【注意事项】

1.各物质的称量务必准确，以确保缓冲液处于最佳状态。

2.不要使用实验室已配制的Tris缓冲液来配制2mol/L Tris碱，因为实验室常见的Tris缓冲液往往使用了HCl调节了pH，成为了Tris-HCl缓冲液，而此处是使用纯Tris，配制Tris-乙酸缓冲液。下述TBE中同样也是不可用Tris-HCl缓冲液来配制。

2.5×Tris-硼酸（TBE）缓冲液

成分及终浓度	配制1L溶液各成分的用量
445 mmol/L Tris碱  445 mmol/L 硼酸盐  10 mmol/L EDTA  水	54g  27.5g 硼酸  3.72 g Na2EDTA·2H2O（pH  8.0）  补足1L

【注意事项】

1.TBE溶液长时间存放后会形成沉淀物，为避免这一问题，可在室温下用玻璃瓶保存5倍的溶液，使用0.5倍的稀释液。

3.6×loading buffer 室温保存

在0.6%、1%、2%的琼脂糖凝胶电泳中它们分别与1kb、0.6kb、0.15kb的双链DNA片断的泳动率大致相同。

【注意事项】

1.该缓冲液用于DNA电泳；

2.该缓冲液中含色素溴酚蓝（BromophenolBlue)、二甲苯腈蓝FF（Xylene Cyanol FF)两种染料（浓度都是0.05%），溴酚蓝在琼脂糖凝胶（0.5% ~ 1.4%）中约与300 bp的双链线状DNA的迁移速度相同，而二甲苯腈蓝FF则与4 kbp的双链线状DNA的迁移速度相等。

4.10×loading buffer

【注意】

1.适合于RNA电泳。

2. 制品中含有SDS， 可即刻停止各种酶促反应。向酶促反应液中加入1/10量的本制品，即可停止反应，此溶液可直接用于琼脂糖凝胶电泳。

3.10X loading buffer 中仅有色素溴酚蓝（Bromophenol Blue)一种染料（浓度0.05%）。

 

二、培养基类

1.LB培养基
(1)将下列组分溶解在0.9L水中：

蛋白胨	10g
酵母提取物	5g
氯化钠	10g

如果需要用4M NaOH（约0.5mL）调整pH至7.0，再补足水至1L。然后分装于250mL锥形瓶并用泡沫或棉塞或封口膜进行封口，121灭菌15—20min

(2)固体培养基

在液体培养基的基础上，加入7g琼脂粉并煮沸，调节pH后定容至1L。

【注意事项】

1.胰蛋白胨和酵母提取粉易粘连称量纸，故称量完成后将称量纸与药品一起放到去离子水中，然后在加热过程中将称量纸上的药品清洗干净取出。

2.用双层封口膜封口灭菌。

3.只要培养基保持澄清状态，其可认为是无菌的，可以继续使用。

2.MS培养基

母液种类	成分	规定用量/（mg·L-1）	称取量/mg	配制体积/mL	扩大倍数	配1L MS培养基吸取量/mL
大量元素	KNO3	1900	19000	500	20×	50
	NH4NO3	1650	16500
	MgSO4·7H2O	370	3700
	KH2PO4	170	1700
	CaCl2·2H2O	440	4400
微量元素	MnSO4·4H2O	22.3	1115	500	100×	10
	ZnSO4·7H2O	8.6	430
	H3BO3	6.2	310
	KI	0.83	41.5
	Na2MoO4·2H2O	0.25	12.5
	CuSO4·5H2O	0.025	1.25
	CoCl2·6H2O	0.025	1.25
铁盐	Na2-EDTA	37.3	1685	250	200×	5
	FeSO4·7H2O	27.8	1390
维生素和氨基酸	甘氨酸	2.0	100	500	100×	10
	盐酸硫胺素（VB1）	0.4	20
	盐酸吡哆素（VB6）	0.5	25
	烟酸	0.5	25
	肌醇	100	5000

注：阴影的两种试剂单独配制成200×的，否则大量元素容易形成沉淀

三 抗生素类

简介

1.抗生素溶液的配置一般用无菌水或醇类充当溶剂。

2.以乙醇为溶剂的抗生素溶液无须除菌处理，用无菌水配的用0.45或0.22um无菌过滤器过滤除菌（个人经验，只要将盛装抗生素溶液的容器灭菌处理后可不用过滤除菌）。

3.所有抗生素溶液均应放于不透光的容器保存，也可用锡箔纸包裹。

4.镁离子是四环素的拮抗剂，四环素抗性菌的筛选应使用不含镁盐的培养基（如LB培养基）。

5.抗生素配制出以后4可保存3个月，-20可保存一年。

6.配制完成后注意分装。

常用抗生素

1.氨苄青霉素（Amp）（100mg/mL）
溶解1g氨苄青霉素钠盐于足量的无菌水中，最后定容至10mL，必要时可以用0.45或0.22um无菌过滤器过滤。分装成小份于-20可贮存一年，4可贮存3个月。常以25ug/mL～50ug/mL的终浓度添加于生长培养基。

2.羧苄青霉素（Car）（50mg/mL）
溶解0.5g羧苄青霉素二钠盐于足量的水中，最后定容至10mL。分装成小份于-20贮存。常以25ug/mL～50ug/mL的终浓度添加于生长培养基。

3.甲氧西林（Met）（100mg/mL）
溶解1g甲氧西林钠于足量的水中，最后定容至10mL。分装成小份于-20贮存。常以37.5ug/mL终浓度与100ug/mL氨苄青霉素一起添加于生长培养基。

4.硫酸卡那霉素（kan）（10mg/mL）
溶解100mg卡那霉素于足量的无菌水中，最后定容至10mL。分装成小份于-20贮存。常以10ug/mL～50ug/mL的终浓度添加于生长培养基。

5.氯霉素（Chl）（25mg/mL）  
溶解250mg氯霉素足量的无水乙醇中，最后定容至10mL。分装成小份于-20贮存。常以12.5ug/mL～25ug/mL的终浓度添加于生长培养基。

6.链霉素（streptomycin）（50mg/mL）
溶解0.5g链霉素硫酸盐于足量的无水乙醇中，最后定容至10mL。分装成小份于-20贮存。常以10ug/mL～50ug/mL的终浓度添加于生长培养基。

7.萘啶酮酸（nalidixic acid）（5mg/mL）
溶解50mg萘啶酮酸钠盐于足量的水中，最后定容至10mL。分装成小份于-20贮存。常以15ug/mL的终浓度添加于生长培养基。

8.四环素（tetracyyline）（10mg/mL）
溶解100mg四环素盐酸盐于足量的水中，或者将无碱的四环素溶于无水乙醇，定容至10mL。分装成小份用铝箔包裹装液管以免溶液见光，于-20贮存。常以10ug/mL～50ug/mL的终浓度添加于生长培养基。

[注意事项]

1.不能高温灭菌的抗生素必须采用过滤灭菌。

2.以乙醇为溶剂的抗生素溶液无须除菌处理。所有抗生素溶液均应放于不透光的容器保存。

3.镁离子是四环素的拮抗剂，四环素抗性菌的筛选应使用不含镁盐的培养基（如LB培养基）。

 

四、核酸提取类

 

1. 10%十二烷基硫酸钠（SDS）溶液

配制量:100mL

[配制方法]在90mL无菌水中溶解10g电泳级SDS，加热至68助溶，加入几滴浓盐酸调节溶液的pH值至7.2，加水定容至1L，分装备用。

[注意事项]

1.SDS的微细晶粒易扩散，因此称量时要戴面罩，称量完毕后要清除残留在称量工作区和天平上的SDS，10%SDS溶液无须灭菌（高温条件下分解会产生CO等有毒气体）。

2.若有沉淀形成，可以适当水浴加热溶解后继续使用。

3.区别于十二烷基磺酸钠。

4.pH极易调过需小心

2.1％DEPC（焦碳酸二乙酯）处理水

配制量：1L

[配制方法]加1mL DEPC 于 999ml水中，用磁力搅拌器在37条件下搅拌4h以上，静置过夜，在121 条件下高温灭菌20min，以使残余的DEPC失活。

[注意事项]

1.DEPC具有强烈的致癌性，故操作时必须戴双层口罩，双层手套于通风厨中进行。

2.此处配制的DEPC水用于RNA提取中70%乙醇的配制及RNA的溶解。

3.TE缓冲液

配制量：100mL。

【配制方法】：量取下列溶液于100mL烧杯中

成分及终浓度	配制100mL溶液各成分的用量
10mmol/L Tris－HCl  1mmol/L EDTA	1mL 1mol/L Tris-HCl（pH8.0，25）  200ul 0.5 mol/L EDTA（pH 8.0）

然后向烧杯中加入80mL去离子水，均匀混合，最后定容至100mL，高温高温高压灭菌后使用。

用途：用于悬浮和贮存DNA

保存：室温长期保存。

4.1MTris缓冲液（Tris-HCl buffer）

配制量：100mL。

【配制方法】：将12.1g的Tris碱溶解于约70mL去离子水中，适当加热溶解，再根据所要求的pH（25下）加一定量的浓盐酸（11.6N），用水调整终体积至100mL。

浓盐酸的体积（mL）	pH
0.86  1.4  2.1  2.85  3.8  4.6  5.6  6.6  7.13  7.6	9.0  8.8  8.6  8.4  8.2  8.0  7.8  7.6  7.4  7.2

【注意事项】

1.称量时应戴口罩，避免吸入Tris粉末。

2.应使溶液冷却至室温时再调PH值，因为溶液的PH值随温度的变化差异很大，温度每升高1，溶液的pH值大约降低0.03个单位。

3.溶液若呈现黄色，则暗含该Tris质量较差，质量较差，不应使用。

4.很多类型的PH计的电极不适合精确测量其PH值，故根据说明书选择合适的电极。

保存：室温可长期保存。

附:温度对50mmol/L Tris·HCl液pH值的影响

4	25	37
8．1	7．5	7．2
8．2	7．6	7．3
8．3	7．7	7．4
8．4	7．8	7．5
8．5	7．9	7．6
8．6	8．0	7．7
8．7	8．1	7．8
8．8	8．2	7．9

 

5. 3M醋酸钠（PH 5.2）

配制量：100mL。

【配制方法】：称取40.8gNaOAc.3H2O置于100mL烧杯中，加入约40mL去离子水搅拌溶解，然后用冰醋酸调Ph至5.2，最后定容至100mL，高温高温高压灭菌后使用。

保存条件：室温保存。

【注意事项】：

1.此溶液常用于沉淀DNA，中和磷酸基团的负电荷，当其pH低于5.0时不可使用。

2.配制时加入去离子水为40ml因为冰醋酸调节pH时需要的冰醋酸量较大，故为保证最后不超过定容体积，去离子水不易加入过多。