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基因组文库(Genomic Library)构建

(2017-10-18 15:35:41)
标签:

医学课题实验

实验外包

生物技术

sci文章编写

分类: 上海晶莱生物技术有限公司
简介: 基因组文库(Genomic Library)构建
提供商: 晶莱生物
服务名称: 基因组文库(Genomic Library)构建
地区: 全国
规格: 基因组文库(Genomic Library)构建
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简介:
用限制性内切酶切割细胞的整个基因组DNA,可以得到大量的基因组DNA片段,然后将这些DNA片段与载体连接,再转化到细菌中去,让宿主菌长成克隆。这样,一个克隆内的每个细胞的载体上都包含有特定的基因组DNA片段,整个克隆群体就包含基因组的全部基因片段总和称为基因组文库。基因文库=基因组文库+cDNA文库 。 
 
载体的种类和特征:
  受体细胞 结构 插入片段 举例
质粒 E.coli 环状 很小,<8kb pUC18/19 ,T-载体,
pGEM3z
λ噬菌体 E.coli 线状 9-24kb EMBL,λgt系列
丝状噬菌体及噬菌粒 E.coli 环状 <10kb M13系列
粘粒载体 E.coli 环状 35-45kb  
BAC E.coli 环状 约300kb  
PAC E.coli 环状 100-800kb PCYPAC
YAC 酵母细胞 线性染色体 100-2000kb  
MAC 哺乳动物细胞 环状 >1000kb  
病毒载体 动物细胞 环状   SV40 载体,昆虫杆状病毒载体
穿梭载体 动物细胞和细菌 环状   pSVK3质粒,PBV,Ti质粒,
 
基因组文库构建步骤:
1、载体:
l噬菌体:48.5kb,插入型(最多可容纳9kb)、取代型(可容纳 38-51kb,最适19-20kb), EMBL, Charon 粘性质粒(Cosmid):4-6kb, 质粒+噬菌体的性质,可容纳大片段的外源基因,最多可容纳46kb。 
酵母人工染色体克隆体系(YAC,Yeast Artificial Chromosome  Cloning System) 
插入大小200—1000kb
2、 载体DNA的制备: 高分子量的外源DNA 100-150kb
 载体DNA酶切反应-----载体臂的纯化-----载体脱磷处理 (常用BamHI)   (蔗糖密度梯度离心)  (碱性磷酸酶) 
3、连接和包装:外源片段与两臂之间的比例,包装蛋白 
4、感染宿主菌:选择合适的宿主菌,LE392, NM538, NM539, KW251等 
5、基因组文库的保存和扩增:
6、测滴度,要在106fu以上
7、保存:氯0仿4℃,7% DMSO -70℃
 
您需要提供: 
动物的血或细胞、新鲜植物叶片、活体昆虫或纯化好的DNA样品。
 
我们提供:
1、文库(10%甘油菌)以及菌落效价(CFU/ml);
2、随机抽样测序结果。

收费标准/服务周期/提供结果:
欢迎咨询详谈,我们会根据您的方案及需求制定详细的服务协议。
更多实验技术服务请浏览网站其他内容,或来电咨询!

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【平台项目开展范围】慢病毒,腺病毒,RNAi类,分子生物实验,病理实验,免疫学实验,细胞实验,动物实验,蛋白组学实验,芯片类实验,并为广大客户朋友们提供课题设计指导、基金申请指导、SCI、核心期刊等服务。


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