产品组成

l DH5α化学感受态细胞 100 μl × 10支

产品简介

本品是采用大肠杆菌DH5α菌株经过特殊工艺处理得到的高效感受态细胞，可用于DNA的化学转化。用pUC19质粒检测，本品的转化效率可达到10⁸ cfu/μg。

基因型

F^-,λ^-,φ80lacZ △M15,△(lacZYA-argF) U169,endA1,recA1,hsdR17(r_k^- m_k⁺),supE44, thi-1,gyrA96,relA1,phoA,deoR

该菌株适用于β-半乳糖苷酶基因的α互补作用下的蓝白斑筛选。

抗生素抗性

无

转化前准备工作

l 准备42°C水浴，并平衡温度

l 将复苏用的培养基预热至室温或37°C

l 如需要进行蓝白斑筛选，请提前1小时涂布X-Gal于抗生素筛选平板上

l 在采用快速转化方法时，抗生素筛选平板请一定要提前30 min置于培养箱预热至37°C

高转化率操作步骤

1.  从−70°C取感受态细胞置于冰浴中，冰上融化（约5 min）。如需分装，取刚融化的细胞分装至无菌预冷的离心管中。

2. 待感受态细胞融化约2/3时，加入目的DNA（100 μl感受态细胞被大约1−50 ng超螺旋质粒DNA所饱和），轻弹混匀，在冰浴中静置30 min。

注意：所用DNA体积不应超过感受态细胞悬浊液体积的1/10。

3. 将离心管置于42°C水浴热激60 sec，然后快速移至冰浴中急冷，静置3 min，切勿摇晃。

4. 向离心管中加入900 μl无菌、不含抗生素的SOC或SOB培养基，混匀后置于37°C摇床复苏培养60 min（200−250 rpm）。

注意：可用LB培养基代替SOC培养基，但转化效率约为使用SOC培养基复苏的1/3−1/2。

5. 将适当体积的上述已转化的细胞加入含有相应抗生素的SOB或LB固体培养基，用无菌玻棒将细胞轻轻涂抹均匀。待液体吸收后，倒置平板，37°C培养1216 h。

注意：如需涂布量较多，可离心（4000 rpm，5 min）后吸除部分培养基，重悬菌体后涂布。

注意：使用含有X-gal的平板进行蓝白斑筛选时，请勿使用含有葡萄糖的SOC的固体培养基，葡萄糖作为竞争底物会阻碍菌落变蓝。

快速转化操作步骤

注意：

l 快速转化仅适用于氨苄青霉素筛选抗性的转化子！

l 对于其他筛选抗性（如卡那霉素）的转化子，转化过程可省去冰浴静置的步骤，但37°C复苏培养30−60 min的步骤是必须的。

l 快速转化法的转化率为10⁶−10⁷ cfu/μg。

1.  取感受态细胞置于冰浴中，可轻柔地用手指加速融化。

2.  待感受态细胞融化约2/3时，加入目的DNA，轻弹混匀，于冰浴中静置2 min。

3.  将离心管置于42°C水浴热激60 sec，然后快速移至冰浴中急冷，静置5 min，切勿摇晃。

4.  直接将感受态细胞悬浮液加到预热的、含有相应抗生素的SOB或LB固体培养基上，用无菌玻棒将细胞轻轻涂抹均匀。待液体吸收后，倒置平板，37°C培养12−16 h。（也可将预热的SOC、SOB或LB培养基加入感受态细胞中进行稀释，颠倒混合后移至固体培养基上涂布。）

其他注意事项

l 请勿用液氮保存感受态细胞。

l 切勿反复冻融。

l 本品在冰浴中融化放置1 h，再次放回−70°C储存，使用时可能会出现菌体沉降的现象，但不会影响转化率，因此冰上分装感受态细胞仍可维持高转化率。但是将本品在冰浴中长时间（≥16 h）的放置，会显著降低感受态细胞的转化率，约降低两个数量级。

l 连接反应液转化时，建议70°C加热15 min使连接酶失活，以得到最佳转化效果。其他种类含有DNA结合蛋白的反应液（如无缝克隆），请按照生产商推荐的方法操作或柱纯化DNA后再进行转化。

l 本品含有DMSO，请带手套操作。

常用抗生素工作浓度