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PCR实验室为什么要三区隔离

(2021-08-08 10:52:21)
分类: 实验室家具

常见的三区指的是:

1、试剂配制区:PCR反应体系的配制区域。

2、标本处理区:包括扩增模板的制备,也就是我们常常提取DNA的地方;

3PCR扩增和产物分析区:进行PCR扩增的区域,也是扩增产物进行凝胶电泳分析的区域。

此外,如果将PCR扩增区域和产物分析区再次分开,就是四区隔离了。

四区隔离,主要目的是防止气溶胶在各个PCR区域之间的流动—最好的方法是干脆每个区域隔一幢楼,那肯定是最佳的隔离措施了,但操作起来肯定不现实,于是便有了针对不同区域设置正负压的方法:

试剂配制区(区):最洁净的区域,保持微正压使得外界空气无法进入隔离污染源。并且阴性模板应该在此区加入PCR管并盖盖,严禁在此区域打开、存放装有DNA模板的离心管;

DNA模板添加区(区):保持微负压,保证内部空气不外泄,以免阳性模板的气溶胶对外界环境造成污染。

扩增及PCR产物分析区(区):保持微负压,使得内部空气不外泄,以免扩增产物的气溶胶对外界环境造成污染。

PCR实验室为什么要三区隔离

操作时遵循区→区→区单一方向进行,不可逆向进行。

对于科研用途的PCR实验室,如果无法达到严格的三区隔离的要求,至少也要做到两区隔离:即正压区和负压区。正压区实施区的功能,负压区实施区,区的功能。

最忌讳也是最可怕的是反过来,在正压区实施区的功能。PCR实验室不同区域间的空气是互相之间否有流通是关键所在。

如果有问,我们的实验室没有正负压的区分,或者是全负压,全正压怎么办呢?那我们的建议是:别怕麻烦,找个远离区(通俗地讲就是打开PCR扩增产物的盖子区域,比如电泳区)的实验室当做PCR I区使用,能省掉后续更多的麻烦。

既然PCR三区隔离的目的是为了阻断气溶胶的交流,请注意以下细节,思考一下气溶胶来自哪里:

1. 每个区域都应配备专用的移液器,不可交叉混用。

2. 每个区域都应配备专用的移液器吸头,不可交叉混用。

3. 如果条件允许,在PCR区工作结束后再次进入PCR I区需要更换实验服、一次性鞋套、帽子、手套。

4. PCR I区、PCR区配备带滤芯吸头。

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