原代培养是从活体标本取材进行体外细胞培养到第一次细胞传代所进行的过程，是建立细胞系的第一步和基础。原代培养细胞在体外第一次传代，代表了培养的细胞发生了重要的转变，说明增殖细胞已占优势和已达到相当数量。

原组织中含有多种类型的异质性细胞，经过培养条件选择，细胞已趋于均一，这些细胞群体可在体外继续增殖和成为某一种种系的细胞群体。因此，原代培养是否成功对于建成细胞系是至关重要的阶段。原代培养成功的关键与以下因素有关：

一、选择合适的原代培养方法

组织块、酶消化和机械分离三种方法，各有优缺点。酶消化法可以获得大量的活细胞．直接培养细胞形成单层，建立细胞系较快速，成功率较高。胰蛋白酶是最常用的方法，用于分离组织和常规传代，但胰蛋白酶可能损伤细胞。胶原酶对细胞间质有很好的作用，因此对消化含胶原组织丰富的正常上皮组织和癌组织效果好，对上皮细胞损伤小。组织块法取材组织量小，当不能用其他方法时可用。机械分离方法可快速获取细胞，但间质细胞多，对细胞损伤大，因此，根据组织来源和培养目的选择方法。

二、选择合适的培养条件

原代培养的组织含有多种类型的细胞，要促进所需要的细胞增殖，抑制混杂细胞生长，可按照细胞营养要求，选择合适的培养基。如果要建立上皮细胞系，由于纤维细胞在体外比上皮细胞更易于生长，因此，限制培养基中血清浓度和加人可刺激上皮细胞生长的必要成分，可以促进上皮细胞生长，抑制纤维细胞生长。

三、精心呵护细胞，适时传代和换液

传代时，酶消化细胞要适时，及时换液保持培养液恒定的pH值。避免由于污染或培养中不慎事故，使细胞毁于一旦。要及时从低代的细胞开始冻存，适时复苏细胞，防止传代细胞中断。