一抗二抗孵育时间及显色时间。包被4℃过夜，可以再4℃保存一周。一抗37℃1-2小时，加二抗以前可以随时终止存放于4℃，存放时间以不超过24小时为宜。二抗孵育时间不能太长，以免非特异性结合增多，一般37℃1小时左右，洗涤要多次，一般5次以上，洗涤时不能用力冲洗，不能用细口滴管加洗涤液，最好用洗板机，或滴瓶。显色时间要因所用显色液而异，我用TMB，它的显色峰值在15-30分钟（常温），要求避光，时间太短会受各组加显色液时间差异影响，时间长了会褪色。硫酸终止反应后，迅速摇匀，尽快读板以免褪色。

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文章来源：南京金益柏生物科技有限公司

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