水果 蔬菜维生素C含量测定法(2，6—二氯靛酚滴定液）——中华人民共和国国家标准

Determination of vitamin C in vegetables and fruits

(2,6-dichloro-indophenol titration method)

UDC 634.1/.8:635.1/.8:543

GB 6195--86

1        适用范围

本标准适用于果品、蔬菜及其加工制品中还原型抗坏血酸的测定（不含二价铁、二价

锡、一价铜、二氧化硫、亚硫酸盐或硫代硫酸盐）不适用于深色样品。

 

2．测定原理

 

染料2，6-二样靛酚的颜色反应表现两种特性，一是取决于其氧化还原状态，氧化态为深蓝色，还原态变为无色；二是受其介质的酸度影响，在碱性溶液重呈深蓝色，在酸性介质中呈浅红色。

用蓝色的碱性染料标准溶液，对含维生素C的酸性浸出液进行氧化还原滴定，染料被还原为无色，当到达滴定终点时，多余的燃料在酸性介质中则表现为浅红色，由染料用量计算样品中还原型抗坏血酸含量。

 

3  仪器设备

 

a.      高速组织捣碎机：8000～12000r/min。

b.      分析天平。

c.      滴定管：25ml、10ml。

d.      容定管：100ml。

e.      锥形瓶：100ml、50ml。

f.      吸管：10ml、5ml、2ml、1ml。

g.      烧杯：250ml、50ml。

h.      漏斗。

 

4  试剂（凡未加说明者均为分析纯）

 

4.1      浸提剂

4.1.1  偏磷酸：2%溶液（W/V）*

4.1.2     草酸：2%溶液（W/V）。

  4.2  抗坏血酸标准溶液（1ml/ml):称取100mg（准确至0.1mg）抗坏血酸**，溶于浸提剂中并稀至100ml。先配先用。

4.2             2，6-二氯靛分（2，6-二氯靛酚哚酚钠盐）溶液：称取碳酸氢纳52mg溶解在200ml

热蒸馏水中，然后称取2，6-二氯靛酚50mg溶解在上述碳酸氢纳溶液中。冷却定容至250ml，   过滤至棕色瓶内，保存在冰箱中。每次使用前，用标准抗坏血酸标定其滴定度。即吸取1ml 抗血酸标准溶液于50ml锥形瓶中，加入10ml浸提剂，摇匀，用2，6-二氯靛酚溶液滴定至溶液称粉红色15s不褪色为止。同时，另取10ml浸提剂做空白试验。

滴定度按式（1）计算：

 

                    滴定度T(mg/ml)=

 

式中：T----每毫升2，6-二氯靛酚溶液相当于抗坏血酸的毫克数；

      C----抗坏血酸的浓度，ml;

      V----吸取抗坏血酸的体积，ml;

      V1----滴定抗坏血酸溶液所用2，6-二氯靛酚溶液的体积，ml;

      V2----滴定空白所用2，6-二氯靛酚溶液的体积，ml。

  4.4  白陶土（或称高岭土）：对维生素C无吸附性。

 

5  测定步骤

 

1.1      样液制备：称取具有代表性样品的可食部分100g，放入组织捣碎机中，加100ml

浸提剂，迅速捣成匀浆。成10～40g奖状样品，用浸提剂将样品移入100ml容量瓶，并稀释至刻度，摇匀过滤。若滤液有色，可按每克样品加0.4g白陶土脱色后在过滤。

1.2      滴定：吸取100ml滤液放入50ml锥形瓶中，用以标定过的2，6-滤靛酚溶液滴定，

直至溶液呈粉红色15s不褪色为止。同时做空白试验。

 

2        结果计算

 

2.1      计算公式：

维生素C按式（2）计算：

                

                 维生素C（mg/100g）=

 

式中：V----滴定样液时消耗染料溶液的体积，ml;

      V0----滴定空白时消耗染料溶液的体积，ml;

      T----2,6-二氯靛酚染料滴定度，ml;

      A----稀释倍数；

      W----样品重量，g。

2.2      平行测定的结果，用算术平均值表示，取三位有效数字，含量低的保留小数点后

两位数字。

2.3      平行测定结果的相对相差，在维生素C含量大于20mg/100g时，不得超过2%小于

200mg/100g时，不得超过5%。

                           

*  偏磷酸不稳定，切勿加热。

** 一般抗坏血酸纯度为99.5%以上，可不标定。如试剂发黄，则弃去不用。若要检察其纯度，可按附录B方法标定。

 

 

附录  A

二甲苯-二氯靛酚比色法

（补充件）

A.1  适用范围

 

测定深色样品中还原型抗坏血酸。

 

A.2  测定原理

 

用定量的2，6-二氯靛酚染料与试样中的维生素C进行氧化还原反应，多余的染料在酸性环境中呈红色，用二甲苯萃取后比色，在一定范围内，吸光度与染料浓度呈线性相关，由剩余染料浓度用差减法计算维生素C含量。

 

A.3  仪器设备

 

  A.3.1  分光光度计或比色计。

  A.3.2  具塞试管：50ml。

 

A.4  试剂（皆为分析纯）

 

  A.4.1  偏磷酸：2%溶液（W/V）。

  A.4.2  乙酸钠缓冲溶液（PH4.0）:500ml 50%(W/V)的乙酸钠溶液于500ml冰乙酸混合。

  A.4.3  2，6-二氯靛酚溶液：参照4.3条。

  A.4.4  二甲苯。

 

A.5  测定步骤

 

  A.5.1  标准曲线的绘制：用6只50ml具赛试管加入5ml2%偏磷酸和5mlpH4.0的乙酸钠缓冲液，然后依次加入0.0,0.1,0.3,0.6,0.9,1.2及1.5ml2,6-二氯靛酚溶液，用力摇动5s，再向各试管中加入10ml二甲苯，在激烈摇动20s，静置分层后与试样管同时比色（无染料的试液作空白），以吸光度为纵坐标，2，6-二氯靛酚的毫升数为横坐标绘制标准曲线。

  A.5.2  吸取5ml2%偏磷酸样品浸出液（参照5.1条）于50ml具塞试管中，加5mlpH4.0的乙酸钠缓冲液和2ml染料溶液，激烈摇动5s，立即加入10ml二甲苯，再激烈摇动20s，待静置分层后，从二甲苯层中小心吸取一份，放入1cm比色杯中于500nm波长下进行比色。记录吸光度A，在标准曲线上查处二甲苯层中2，6-二氯靛酚的毫升数。整个操作用在30min内完成。

 

A.6  计算公式

 

 

             维生素C（mg/100g）=

 

 

式中：2----所用2，6-滤靛酚染料的体积，ml;

      V----查的2，6-二氯靛酚溶液的体积，ml;

      A----稀释倍数；

      T----染料滴定度，mg/ml;

      W----样品重量，g。

 

 

 

 

 

 

 

 

附 录  B

抗坏血酸纯度检验法

（补充件）

B.1  称取100mg(准确至0.1mg)抗坏血酸待测样品，用2%偏磷酸或2%草酸溶液溶解稀释至100ml。

B.2  吸取抗血酸溶液1ml于盛10ml2%偏酸磷或2%草酸溶液的锥型瓶中，加入6%碘化钾溶液0.5ml和1%淀粉溶液五滴，摇匀。用1.67×10-4M碘酸钾标准溶液滴定，终点为极淡蓝色。

B.3  计算公式

  B.3.1  抗坏血酸浓度按式（B1）计算：

 

                      抗坏血酸浓度=

 

式中：V1----滴定时消耗1.67×10-4M碘酸钾标准溶液的体积，ml;

      V2----所取抗坏血酸溶液的体积，ml;

      0.088----1ml1.67×10-4M碘酸钾溶液相当于抗血酸的重量，mg；

B.3.2  抗坏血酸纯度（%）按式（B2）计算：

 

                      抗坏血酸纯度（%）=

 

 

式中：C----所标定抗坏血酸的浓度，mg/ml;

      V----抗坏血酸溶液体积，ml；

      W----抗坏血酸重量，mg。

 

 

附加说明：

本标准由中华人民共和国农牧渔业部提出。

本标准由江苏省农科院综合实验室负责起草。