最近有同学做CFSE检测，现讲网上的相关信息整理介绍一下：
一、原理
荧光染料CFSE， 也可称为CFDA SE（5，6- carboxyfluorescein
diacetate，succinimidyl ester）
即羟基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺脂，是一种可穿透细胞膜的荧光染料，具有与细胞特异性结合的琥珀酰亚胺脂基团和具有非酶促水解作用的羟基荧光素二醋酸盐基团，这使得CFSE成为一种良好的细胞标记物。
当CFSE以含有两个乙酸基团和一个succinimidyl
ester功能基团的形式存在时，不具有荧光性质，而具有细胞膜通透性，能够自由进入细胞；而当其扩散进入细胞内环境，内源的酯酶可将其乙酸基团水解，此种形式的CFSE分子具有很高的荧光活性，被激发能够产生绿色荧光，却不再具有膜通透性；同时，其含有的succinimidyl
ester基团能与胞内的细胞骨架蛋白中的游离胺基反应，最终形成具有荧光的蛋白加合物。
因此，当细胞进行分裂增殖时，具有荧光的胞质蛋白被平均分配到第二代细胞中，这样与第一代细胞相比，其荧光强度便会减弱至一半；以此类推，分裂得到的第三代细胞的荧光强度便会比第二代细胞再次减弱。这种现象可以在488nm的激发光下，采用流式细胞仪检测分析，通过检测到细胞荧光强度不断的降低，进一步分析得出细胞分裂增殖的情况。
二. 如何看实验结果
http://s13/mw690/006l4rFwty72kSibxlGcc&690
细胞摄取染料后，信号最强，在最右边（不分裂的话，就是那个蓝色的峰），随着细胞的每一次分裂，细胞内染料的浓度被稀释一倍，信号也减弱一半。以此类推。由于细胞的分裂不同步，所以最后的结果是绿色的那些齿状的峰。
最好可以用Flow Jo 做详尽的分析
http://blog.sciencenet.cn/home.php?mod=space&uid=349948&do=blog&id=604408
|
Brdu和CFSE检测增殖的区别，为什么免疫细胞都是用CFSE？
BrdU原理上是掺入DNA，所以实质上还是属于检测凋亡或S期的细胞技术。
|
BrdU一般是短时间检测，检测目的是看有多少细胞进入了S期，看增值率。由于是掺入实验，时间不能过长，超过一个细胞周期分析起来就复杂了。 |
而CFSE则是进入细胞后，随着细胞分裂逐渐分配到子代细胞中，故属于真正的检测细胞增殖能力的技术。
比如一个永生化的细胞株，一个周期在24小时左后，如果你测加药后24小时内（一个周期内）的变化用BrdU。因为这时候细胞还没有分裂成两个，CFSE不可能监测得出来，你还可以对细胞进行细分（G0，进入了S期的细胞等等）。
超过24小时，比如你要测3天的话就要用CFSE，不然你的细胞株肯定全部已经BrdU阳性了，不能反映速率了。比如都是永生化的细胞，A种一个周期是18小时，另外的B种是24小时，但是3天之后，两种细胞BrdU阳性率肯定都是100%，因为都进入过了分裂。这时候使用CFSE不仅能看到多少个细胞进入了增殖，还能看到那株分裂速度更快，进入了第几代，每一代的比例有多少。所以前提就是，细胞必须分裂了才能看到CFSE的变化。
其实还是要根据你具体的实验需求来选择。
|
加载中，请稍候......
加载中…
(2016-06-09 06:24:36)