加载中…封闭液的选择
(2016-03-22 20:42:29)
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分类： 产品概述 |
今天小编给大家介绍一下在western-blotting实验和elisa实验中的封闭液的选择。在实验中，封闭液是用来封闭没有结合蛋白质的位置，以避免非特异性结合影响实验结果。
Western实验封闭液选择
封闭液(Blocking
Buffer)可以用于Western时转移了蛋白样品的PVDF膜或NC膜的封闭。封闭后，可以减小后续的一抗或二抗和膜的非特异性结合，降低背景，增强信噪比。在做Western
封闭液中的蛋白可以与固相载体表面的空白位置结合，同样以机械填补（堆积）和吸附覆盖的方式结合在膜上，因为有“填补”和覆盖“蛋白结合位点以避免一抗的非特异性结合，所以有”封闭“的说法。同样这两种作用使封闭液中的蛋白能够狠牢固的结合在空白位置上，这样抗体蛋白就不会被非特异性的吸附到膜上，而只会跟特异性蛋白结合。
封闭液应封闭所有的未结合位点而不替换表面上的靶蛋白，不结合靶蛋白表位，也不与抗体或检测试剂有交叉反应。
常用封闭液选择：
BSA
BSA是最常用的封闭液，成分单一适用于大多数情况。若免疫原是偶联BSA的，BSA有很强的免疫原性，会导致产生很多针对BSA的抗体，为避免交叉反应，不能用BSA，脱脂奶粉封闭，可以选用酪蛋白或无蛋白的封闭液。
封闭血清
封闭血清的原理主要有两点，第一是待测样本有些与蛋白非特异性结合的物质，从而导致背景过高，因此可以用BSA或血清封闭掉这部分分特异性的结合，从这点看，BSA和血清没有明显区别。第二待测样品中可能会有Fc受体，可以和抗体恒定区结合，与抗体特异性无关，封闭血清中有抗体，因此用血清可以封闭掉一抗及二抗和样本Fc受体之间的结合，BSA无法封闭Fc受体。
脱脂奶粉
脱脂奶粉最大的优点是价格便宜，但由于成分相对复杂，所以适用范围要狭窄一些。磷酸化抗体也许会导致背景增加，此外，因为自身含有生物素，不能用于生物素标记的抗体系统。脱脂奶粉种含有少量的生物素和碱性磷酸酶残留，在使用生物素-亲和素系统和碱性磷酸酶标记的二抗时，也会使得高背景或本底水平增高。
给大家推荐一款抗体在线上的封闭液：
Blocking Buffer for Fluorescent Western Blotting
编号：ABIN925618
应用范围：示踪(Lbl), Western Blotting (WB)
产品特性：无菌操作无菌过滤；阻塞剂
Elisa实验封闭液选择
Elisa实验封闭液的原理和western实验差不多，但是选择却有差别。Elisa实验中我们会注意到Elisa试剂盒说明书上写到封闭液用蔗糖溶液，一般是用BSA或酪蛋白的蛋白分子封闭空白位点，那首先了解一下蔗糖封闭的原理：
1、Elisa实验中，蔗糖本身没有封闭作用。
2、封闭液一般是BSA、酪蛋白等或者是Tween等。
3、加蔗糖的主要目的是保护Elisa板子吸附（包被）的蛋白，起到“保护剂”的作用。
4、蔗糖溶液一般在Elisa板子经过BSA封闭后加，当然也有将蔗糖加到封闭液中同时进行处理。
至于哪一种更好需要你实验后来验证，但多数选择前者。
封闭剂还可用5%的脱脂乳（市售即可），0.4%的明胶，但是实验表明前者比较好，后者不容易洗干净未结合上的明胶。
封闭剂的原理就是与酶联板上未结合抗原或抗体的微孔中用封闭剂封闭上，结合抗体或抗原的时候就不会产生非特异结合了，不会影响实验的准确度。
编号：ABIN925585
背景：ELISA微孔缓冲带稳定器的设计块涂有抗原的微孔中，抗体或其他配体和稳定板干燥。酶联免疫吸附稳定剂。
应用备注：本产品是一种“'ready-to-use”1X溶液稳定ELISA板存储之前，ELISA。与抗原或抗体涂层后，洗的ELISA微孔含量增加ELISA微孔缓冲稳定剂各良好的微孔板足够量。让我们站在常温2h。每一个好的内容和允许吸板的干燥。密封板和储存，以供将来使用。该缓冲液中含有磷酸盐缓冲液，和专用试剂盒块和稳定酶联免疫吸附板。专利组合稳定剂和防腐剂的使用，叠氮化物和无汞。
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小编：Sherry
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