（摘自中国仪器在线http://0731lab.net/）

1．应用范围：
        此方法应用于游离脂肪酸含量低于2％的食用油脂的甲酯化。（如样品含有较高的游离脂肪酸，要使用过量的氢氧化钾。游离脂肪酸和皂化产物不能被氢氧化钾－甲醇溶液甲酯化，因此该方法能获得样品中甘油酯部分的甲酯化产物。）所得的脂肪酸甲酯用于测定油脂中脂肪酸的种类和含量。
天然油脂中所含的脂肪酸几乎全部为偶碳数的直链脂肪酸，常见的饱和脂肪酸有月桂酸（C12:0）、棕榈酸（C16:0）和硬脂酸（C18:0），不饱和酸有油酸（9c－C18:1）、亚油酸（9c，12c－C18:2）和亚麻酸（9c，12c，15c－C18:3）等。亚油酸、亚麻酸等不饱和脂肪酸具有重要的生理功能，是人体必须的脂肪酸，其含量对油脂的营养价值影响很大。这类不饱和脂肪酸也常用n、ω速记法表示，是以离甲基端最近的双键第一个碳原子位置来表示双键的位置，如此油酸可表示为18:1ω9, 亚油酸为18:2ω6，亚麻酸为18:3ω3（此速记法仅限于双键为顺式，如有多个双键为五碳双烯型：-CH=CHCH2CH=CH-的直链不饱和脂肪酸）。
天然不饱和脂肪酸的双键几乎全部为顺式，在反刍动物油脂中会有少量反式脂肪酸。饮食油脂中的反式不饱和脂肪酸多来自于油脂的加氢处理。
通常我们的测定结果不表示为具体的每一种脂肪酸的含量，而是给出油脂中饱和脂肪酸、不饱和脂肪酸、反式脂肪酸以及ω3－不饱和脂肪酸，ω6－不饱和脂肪酸的总量。

2. 测定原理
        油脂经过甲酯化后，经色谱分离后，进行定性和定量分析。
3. 试剂：
         3.1 KOH甲醇溶液：浓度约2mol/L。在缓缓加热或超声的条件下用100ml无水甲醇（用HPLC级甲醇经无水Na₂SO₄干燥后，过滤而得）溶解13.1g KOH，加入约1g 无水Na₂SO₄作为干燥剂，过滤溶液得到清液备用。如这一溶液储存时间稍长，会生成少量白色沉淀（K₂CO₃），此时过滤或离心，用其清液即可。
3.2异辛烷 HPLC级

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3.3 脂肪酸甲酯的混合标准品(SUPELCO)，CH₂Cl₂溶液，总浓度10000ppm，共含37种脂肪酸甲酯，各脂肪酸甲酯的名称，CAS号和浓度见下表：

注：21号峰为十九酸甲酯的峰

          http://s2/mw690/0061RkbIty6UUtZRONj41&690
4.仪器：
GC-FID
振荡器
台式离心机
 
5. 样品处理：
5.1 标准溶液，脂肪酸甲酯标准品总浓度为10000ppm，其中各组分的浓度分别在200或400ppm（饱和偶碳数脂肪酸甲酯为400ppm，奇碳数和不饱和脂肪酸甲酯为200ppm；十六酸甲酯为600ppm，油酸甲酯为400ppm，见上表），以异辛烷稀释标准品。

标准溶液在4°C冰箱保存。以上校准系列浓度水平分别为：混标中浓度为600mg/L组分为3,6,12,18,24mg/L;混标中浓度为400mg/L组分为2,4,8,12,16mg/L;混标中浓度为200mg/L组分为1,2,4,6,8mg/L。
5.3 样品甲酯化：
5.3.1 称取样品约60mg，精确到0.1mg。以异辛烷4ml溶解。对于固态油脂样品应在70℃以下水浴中融解后取样，以保证样品均匀（此样品称取和溶解到10ml的离心管中，对下面操作比较方便）。
5.3.2 加入1ml KOH甲醇溶液，振荡1min。
5.3.3 离心（3000 r / min，5分钟），取上层清液用于GC测定
 
6 测定
得到的脂肪酸甲酯溶液，用异辛烷稀释50～100倍（对于含量不同的脂肪酸组分，可能稀释倍数不同），GC－FID测定。
GC分析条件：
色谱柱：DB－23，length: 60m, I.D. 0.25mm, film 0.15µm
进样口温度：250℃
检测器温度：250℃
分流进样，split ratio＝1:10
载气：氮气
流速：1.0ml/min
柱温程序：

总运行时间：50.0min
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7 计算：以标准品色谱图中各峰的保留时间和相对含量定性，外标法定量。各峰的出峰顺序见标样表。由色谱法得到的是油脂样品中各脂肪酸甲酯化后的量，还需要折算回脂肪酸的量，
脂肪酸折算因子 f _{i : n} = M _{i : n} (acid) / M _{i : n} ( methyl ester)，
脂肪折算因子  f_TGi = M _{i : n} (fat) / M _{i : n} (methyl ester)见下表：
其中i为脂肪酸碳数，n为双键数, M是分子量。
（原子量C＝12.01，H＝1.008，O＝16.00）。