抗体的结构和片段
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一个完整的全长抗体的基础单元结构有四条肽链组成,包括两条重链和两条轻链,并通过二硫键结合在一起。抗体的形状像一个Y字母,Y结构的铰链区具有弹性。每条肽链就有一个恒定区(在所有的抗体中都非常的保守)和一条可变区(在一个种抗体中都是特异性的)。轻链可变区的标示符号是VL,而轻链恒定区的标示符号是CL(图一左)。 类似的,重链的可变区和恒定区分别被标示为(VH)和(CH)。碳水化合物通常和重链的CH2区域结合。Fc段只包括重链的恒定区(CH), 但是和抗原结合的Fab段(Fab)包括一个恒定区和重链的可变区以及轻链的可变区(VH and VL); Fv区域只包含两个可变区。
抗体片段不仅保留了完整单克隆抗体的特异性,还有着独特和优越的科研性以及临床应用性。在过去的十几年中,FDA已经批准多种用于治疗的抗体药物产品,因此,对于抗体片段药物的研究逐渐成为生物制药行业的主流。一个抗体片段可以通过化学试剂和基因工程的方法获得,化学试剂片段通过是通过打断铰链区的二硫键或者是用蛋白酶,包括胃蛋白酶和木瓜蛋白酶,消化抗体后产生的。基因工程产生的片段提供大量的片段,每一个都能有特异性的结合区和功能特质。
Fab, Fab', (Fab')2, 和 Fv
抗体经过化学试剂处理的和蛋白酶消化可以得到抗原结合片段(Fab), 其来源于IgG 和 IgM 亚型抗体的可变区。去掉Fabs片段的抗体部分就是Fc片段了,由重链的恒定区组成。 抗原结合片段包括了Fab, Fab', (Fab')2, 和 Fv。 这些片段能够结合抗原,但是它们缺少Fc段,其包括重链的恒定区2和3。当抗体被木瓜蛋白酶消化后,两个独立的F(ab)片段从Fc区域分离下来。然而用胃蛋白酶消化后,一个带有小部分的Fc铰链区的 F(ab')2 片段从抗体中分离下来。尽管利用化学试剂的方法分离抗体的片段能够产生很多有用的诊断和治疗的工具,但是是非常费时的而且需要大量的抗体作为原材料。
单价的F(ab) 片段只有一个抗原结合区,然而多价的F(ab')2 片段有两个抗原结合区,它们通过二硫键结合在一起。F(ab')2 片段产生2个单价的Fab' 片段和一个游离的硫基,其能够用于其他分子的结合。
Fv 片段是IgG和IgM类型抗体通过酶法分析后产物中最小的片段。Fv片段抗原结合区,其由VH和VC区域组成,但是他们缺少CH1和CL区域(Figure 1 right panel)。VH 和VL 通过非共价键在Fv 片段里结合在一起。
ScFv, 双特异抗体,三特异抗体,四特异抗体,双-scFv,mimi抗体,Fab2,Fab3
基因工程方法能够产生单链可变区(ScFv),它是Fv类型片段,其包括了通过易弯曲多肽链接在一起的VH和VL区域;如果结合区至少有12个残基的长度,ScFv片段就是单抗;通过操作V-结构域和铰链区的长度可以创作不同形式的Fv分子;连接体是3-11残基的产生的scFv分子不能折叠成有功能的Fv结构域。这些分子和其他的scFv分子一起可以创作出一个双价的双特异性抗体;如果连接体的长度小于3个残基,scFv 分子相互作用后能够产生三特异性或者四特异性抗体。多价的scFvs与对应的单价的抗体相比具有更强的结合抗原的亲和;Mini抗体是scFv-CH3融合蛋白,被装进到双价的二聚体中。 Bis-scFv 片段是双特异性的;小型化的ScFv片段能够通过两个不同的可变区产生,能够让这些Bis-scFv分子同时结合两个不能的表位。基因学方法能够用来产生双特异性的Fab 二聚体(Fab2)和三特异性的Fab 三聚体(Fab3)。这些抗体片段同时能够结合2 (Fab2)或者3(Fab3)不同的抗体。

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