基本信息

货号：22022 (25 mg) 22028 (5 x 0.5 mg)

储存方式：-20避光

保质期：自收到起12个月

简介

众所周知，细胞的荧光标记是检测样品中存活细胞的有效方法。流式细胞仪结合荧光染色是分析异质细胞群的有力工具。在所有现有的荧光染料中，荧光素二乙酸酯（FDA）及其衍生物（例如CFSE）是非荧光分子，其扩散到细胞中并被细胞内非特异性酯酶水解以产生荧光产物。荧光产物仅在具有完整细胞膜和活性酯酶活性的细胞中产生和积累，而死细胞不被染色。 FDA及其类似物（如CFSE）的膜转运和细胞内水解的精确动力学与细胞功能有关。对于多重转染GFP的细胞或使用FITC标记的抗体，我们提供功能类似于CFSE的CytoTell™染料，可用于使用GFP或FITC标记抗体的多色应用，因为这些染料具有激发或发射光谱不同于CFSE及其荧光素类似物。此外，我们的CytoTell™染料不仅消除了与CFSE相关的染料外排缺陷，而且在成像或流式细胞分析之前与染色细胞中的细胞培养基相容。

储存和处理条件

如果储存在-20°C，CFSE应保持稳定至少12个月，避免光照和潮湿，避免冻/融循环。

物理化学特性

分子量：557.46

溶剂：二甲基亚砜（DMSO）

光谱性质：Ex / Em = 494 / 521nm

分析方案

简要总结

使用测试化合物制备细胞®

添加0.5至5μMCFSE工作溶液®

在室温或37 oC下将染料与细胞一起孵育10至30分钟®

移除染料工作溶液®

使用Ex / Em = 490/520 nm的流式细胞仪进行分析 （FL1）

注意：以下是我们推荐的活细胞方案。 它只提供指导，应根据您的具体需求进行修改。

1.准备10 mM DMSO储备溶液

对于＃22022：将5.6mg溶于1ml DMSO中以制备10mM储备溶液（1mg / ml相当于1.8mM）;对于＃22028，向每个小瓶中加入90μLDMSO以制备10mM储备溶液。

注意：应及时使用原液; 任何剩余的溶液应等分并在<-20冷冻。 避免反复冻融循环，避免光照。

2.准备CFSE工作解决方案

在使用前准备CFSE工作溶液（0.5至5μM），用Hanks和20 mM Hepes缓冲液（HHBS）或您选择的缓冲液（pH 7）稀释步骤1中的DMSO储备液（20,000至2,000次），并将它们混合。

3.用流式细胞仪或荧光显微镜分析细胞：

3.1用测试化合物处理细胞一段所需的时间。

3.2离心细胞，每管取1-5×10⁵个细胞。

3.3将细胞重悬于500μL染料工作溶液中（来自步骤2）。

3.4在室温或37°C下用染料溶液孵育细胞10到30分钟，避光。

3.5从细胞中取出染料工作溶液，用HHBS或您选择的缓冲液洗涤细胞。将细胞重悬于500μL预热的HHBS或培养基中，每管加入1-5×10⁵个细胞。

3.6使用流式细胞仪（FL1通道）或荧光显微镜监测Ex / Em = 490 / 520nm处的荧光变化。