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rna提取试剂盒 |
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qpcr样本取样要求 |
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杂谈 |
LncRNA 引物到底和mRNA 引物设计有什么不同?
序列提供的数据库更多样;
mRNA 序列通常在ncbi的库里就可以找得到,而lncRNA数据库,就比较多了;
建议客户提供二代测序的测序结果或者基因芯片筛选后的探针序列,方便进行引物设计;
序列更复杂,需要更加明确的基因比对;部分序列由于和mRNA 某转录本序列太接近,而不能设计相应的QPCR 引物;
根据序列比对情况,可以明确,是否可能设计特异的lncRNA, 或者设计的引物同时会检测其他基因;
实验可能会更复杂,部分lncRNA 可能不含polyA 尾,所以在常规的CDNA 中不含;需要以RNA 为模板,直接进行特异性逆转录和检测;
在样本中可能含量很低,需要更灵敏的检测方法;
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pcrqpcr |
Q问题: 普通PCR 和 QPCR 引物 是否一样?
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rtpcrmicrorna |
Stem-loop实时定量RT PCR
传统实时定量RT PCR只能检测到miRNA前体,而Stem-loop实时定量RT PCR技术可以解决这一问题。Stem loop实时定量RT PCR是一项高特异度、敏感度的检测miRNA表达的实验技术,包括设计具有茎环(stem loop)结构的反转录引物和用miRNA荧光标记的特异分子探针进行实时PCR 二个关键步骤。该技术具有以下优点:高度特异性,对序列高度同源的miRNA也可精确区分;超宽的定量线性范围和高度的检测灵敏度;样品消耗少,仅需1~10 ng的总RNA;适用范围广,总RNA、细胞裂解物以及纯化的RNA都可用于miRNA的定量检测。
Stem-loop实时定量RT PCR基本原理: microRNA的RT-PCR一般使用茎环结构的
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raybiotechg系列蛋白芯片操作说 |
raybiotech
(参见英文protocol)
1.实验材料及试剂
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如何查找基因 |
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qpcr引物篇如何针对引物序列进行blast确定引物是否可用 |
引物从文献中得到后,或者由公司提供得到后,比较稳妥的方式是在ncbi网站上对上游和下游引物分别进行Blast分析。
具体方法是:
google 搜索blast,点击,进入ncbi的blast 网站:
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qpcr引物篇普通pcr和qpcr引物是否一样 |
Q问题: 普通PCR 和 QPCR 引物 是否一样?